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肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因在大肠杆菌中的表达

隋姗姗;马江锋;侯顾伟;奚永兰;姜岷;   

  1. 南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室;
  • 出版日期:2011-05-26 发布日期:2011-05-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(21076105);;“十一五”国家科技支撑计划重大项目(2008BAI63B07)

  • Published:2011-05-26 Online:2011-05-26

摘要: 以肠膜明串珠菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 581 bp的蔗糖磷酸化酶(SPase)DNA片段。将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,构建获得重组质粒pET-SPase。测序结果与GenBank上已公布的基因序列比较,有1个碱基发生变化,但该碱基的改变未引起氨基酸序列的改变。将pET-SPase转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态中,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约为55 kD,与预期大小一致,结果表明SPase基因在大肠杆菌中进行了表达。酶活分析,产物的比活为1.8 U/mg,证明了表达产物具有预期的酶活性。进一步考察了IPTG浓度、诱导温度和时间等因素对重组菌表达的蔗糖磷酸化酶的影响。在优化条件下,该蔗糖磷酸化酶的比活可以达到16.6 U/mg,比优化表达条件前的酶比活提高了9.2倍,比已报道的肠膜明串珠菌粗酶液比活(7.1 U/mg)提高了2.34倍。

关键词: 蔗糖磷酸化酶, 肠膜明串珠菌, 基因克隆, 原核表达