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pBV220/hIL-4优化表达及其包涵体复性研究

孙卫国;李邦印;张灵霞;李国利;熊志红;程小星;   

  1. 解放军第309医院结核病研究所;
  • 出版日期:2011-05-26 发布日期:2011-05-26
  • 基金资助:
    国家传染病重大专项(2008ZX-10003-012)

  • Published:2011-05-26 Online:2011-05-26

摘要: 旨在对人白细胞介素-4(hIL-4)上、下游序列进行优化设计,提高在原核系统中的表达量,并对表达的包涵体进行复性研究提高复性率。利用B ioSun的RNA二级结构预测模块辅助设计hIL-4起始密码子(AUG)上、下游的序列,使局部二级结构的自由能满足高表达要求;根据pBV220载体和原核系统的特点优化引物序列提高hIL-4原核表达量。优化hIL-4包涵体复性条件和方法,提高复性率和生物活性。结果显示,成功构建了pBV220/hIL-4高效表达载体,原核表达的重组人IL-4占细菌总蛋白的35%以上,明显高于优化前表达量;经过复性研究hIL-4包涵体复性率可达到15%以上,生物活性鉴定发现,纯化的hhIL-4蛋白的比活等同或高于国外同类产品。影响原核表达的条件较多,对表达序列的优化设计可以大大提高蛋白的表达量。针对人IL-4基因序列的优化设计提高了人IL-4基因的表达,复性方法的改良提高了复性率和生物活性。

关键词: 人白细胞介素-4, 优化表达, 包涵体, 生物活性