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绵羊Myostatin基因敲除载体的构建

孙丹;金梅;杜立新;魏彩虹;张莉;路国彬;陆健;吕延飞;   

  1. 辽宁师范大学生命科学学院生物技术与分子药物研发重点实验室;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所国家畜禽分子遗传育种中心;扬州大学动物科学与技术学院;德州市畜牧兽医局;
  • 出版日期:2011-05-26 发布日期:2011-05-26
  • 基金资助:
    大连市科技计划基金项目(2010B14NC104);;国家“十一五”科技支撑计划项目(2009BADA5B01);; 国家自然科学基金项目(30972079);; 转基因生物新品种培育重大专项-转基因肉羊育种新材料创制课题(2009ZX08008-003B)

  • Published:2011-05-26 Online:2011-05-26

摘要: 根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除载体。利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9 kb,包括全部的exon1,intron1,exon2及部分启动子和大部分intron2;同源短臂1.1 kb,包括部分exon3和3′非翻译区序列,将二者连入PloxpII正负筛选敲除骨架载体,利用骨架载体上Neo基因替代Myostatin基因的exon3,从而成功构建专门针对Myostatin第3外显子区域缺失的置换型敲除载体PloxpⅡ-OVIS-MSTN。酶切和测序鉴定证明载体构建正确,为后续获得绵羊Myostatin基因缺失型体细胞株奠定试验基础。

关键词: 绵羊, Myostatin基因, 基因敲除, 置换型敲除载体