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构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞

王玮;袁建龙;金永;朱兵;岳群华;梁浩;郭旭东;刘东军;仓明;   

  1. 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室;
  • 出版日期:2011-11-26 发布日期:2011-11-26
  • 基金资助:
    国家“863”计划项目(2008AA101007);;

  • Published:2011-11-26 Online:2011-11-26

摘要: 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。

关键词: 绵羊, 卵泡抑制素, 骨骼肌特异表达载体, 转基因细胞系