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人Cε3-Cε4基因克隆、表达及纯化复性

刘中成;时海浪;张艳芬;赵丽君;王培莹;常斌;李雨诗;   

  1. 河北省药物质量分析控制重点实验室;河北大学实验室管理办公室;
  • 出版日期:2011-11-26 发布日期:2011-11-26
  • 基金资助:
    河北省自然科学基金资助项目(C2010000248);;

  • Published:2011-11-26 Online:2011-11-26

摘要: 利用RT-PCR技术从变态反应疾病患者外周血淋巴细胞中克隆出人Cε3-Cε4基因,将其克隆至原核表达载体pET-17b中,转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE后Cε3-Cε4蛋白表达量占细菌总蛋白的30.7%。菌体经裂解、2 mol/L尿素洗涤后,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达85.5%。用8 mol/L尿素溶解包涵体,经Ni-NTA柱对变性状态下的目的蛋白进行纯化,并利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,最终目的蛋白纯度为95.3%。Western blotting方法对Cε3-Cε4蛋白进行鉴定,为该蛋白的进一步相关研究奠定基础。

关键词: Cε3-Cε4, 表达, 柱上复性