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谷氨酸棒杆菌ldh基因的敲除

伍展红;郑穗平;   

  1. 华南理工大学生物科学与工程学院;
  • 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
  • 基金资助:
    中央高校基本科研业务费资助项目(2009ZM0289);;

  • Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要: 谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态细胞。分别在卡那霉素抗性平板及10%蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC 13032-Δldh。应用荧光定量PCR检测,ATCC 13032-Δldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC 13032相比,相对表达量为0。ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响。

关键词: ldh基因, 基因敲除, 谷氨酸棒杆菌, 荧光定量PCR