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人BMP4基因的克隆及其原核表达载体的构建

刘秋英;陈伟;毛国梁;熊盛;钱垂文;利奕成;王一飞;   

  1. 暨南大学生命科学技术学院生物医药研究开基地;
  • 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
  • 基金资助:
    广东省教育部产学研结合项目(2009B090200070)

  • Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要: 以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒。酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子。重组质粒转化至感受态的Rosseta宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,从胎盘组织中成功地克隆到人BMP4基因,与NCBI中公布的序列100%相符合,原核表达载体pET22b-BMP4转化至Rosseta构建表达菌体,经IPTG诱导后电泳分析可见重组蛋白表达的条带。

关键词: 骨形成蛋白4, 基因克隆, 原核表达, pMD18-T载体, pET-22b载体