]*>","")" /> 棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化

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棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化

李芬;刘小宁;   

  1. 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室;
  • 出版日期:2012-05-26 发布日期:2012-05-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(3096022);;

  • Published:2012-05-26 Online:2012-05-26

摘要: 旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,提取无细胞内毒素的质粒,转染处于对数生长期的昆虫细胞Sf9,通过检测荧光素酶的表达量验证启动子的活性。对转染后的检测时间、加入转染质粒的量,转染质粒与内对照质粒pRL-TK的比例分别进行了优化,进而确定检测的最优条件。结果表明,转染后的最适检测时间为24 h,转染质粒的最适用量为3.2μg,报告质粒与内对照质粒用量的比例为10 1时转染效率最高。

关键词: 细胞色素P450, CYP6B6基因启动子;Sf9细胞, 脂质体, 转染, 活性检测