产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.026

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (6): 181-186.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.026

产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究

王川¹, 李丽¹, 魏丕伟¹, 黄非²

1. 四川理工学院生物工程学院，自贡 643000
2. 四川大学生命科学学院，成都 610064

收稿日期:2015-10-27 出版日期:2016-06-27 发布日期:2016-06-28
作者简介:王川，男，博士，研究方向：资源微生物，生物反应器；E-mail：watpc57944@163.com
基金资助:
四川省教育厅理工科重点项目(14ZA0211)

Cloning and Function of Gene for Cytochrome P450 from a Chlorogenic Acid-producing Endophytic Bacterium

WANG Chuan¹, LI Li¹, WEI Pi-wei¹, HUANG Fei²

1. College of Bioengineering，Sichuan University of Science & Engineering，Zigong 643000
2. College of Life Sciences，Sichuan University，Chengdu 610064

Received:2015-10-27 Published:2016-06-27 Online:2016-06-28

摘要/Abstract

摘要： 以一株产绿原酸的内生枯草芽孢杆菌为基础，对其绿原酸途径的关键酶基因进行克隆和功能研究。克隆该内生菌的细胞色素P450基因并进行原核表达，对重组蛋白进行肉桂酸羟基化酶(C4H)酶活测定。结果显示，从内生菌中克隆了4个细胞色素P450酶系基因并进行了原核表达，其中P-4重组蛋白具有C4H活性，产生的香豆酸与LC-MS检测的结果一致，该酶的最适温度范围较宽，产物香豆酸对该酶有抑制作用。该内生菌可能利用其细胞色素P450酶系作为C4H的同工酶从而将产物导入绿原酸合成途径。

关键词: 绿原酸, 细胞色素P450, C4H, 表达, 活性

Abstract: Based on a chlorogenic acid-producing endophytic Bacillus subtilis，cloning and function of a key gene in the synthetic pathway of chlorogenic acid was studied. The cytochrome P450 gene of the endophyte was cloned and expressed in prokaryotic vector，and the cinnamate 4-hydroxylase(C4H)activity of the recombinant proteins were determined. Four cytochrome P450 genes were cloned and expressed in prokaryotic vector，and the recombinant protein P-4 presented C4H activity. The coumarate produced by the C4H activity was the same as the result measured by LC-MS. The activity of P-4 existed in a broad optimal temperature and was inhibited by product coumarate. It is supposed that，taking cytochrome P450 as isozyme of C4H，the endophyte led the product coumarate to the synthetic pathway of chlorogenic acid.

Key words: chlorogenic acid, cytochrome P450, C4H, expression, activity

王川, 李丽, 魏丕伟, 黄非. 产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究[J]. 生物技术通报, 2016, 32(6): 181-186.

WANG Chuan, LI Li, WEI Pi-wei, HUANG Fei. Cloning and Function of Gene for Cytochrome P450 from a Chlorogenic Acid-producing Endophytic Bacterium[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(6): 181-186.

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产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究

Cloning and Function of Gene for Cytochrome P450 from a Chlorogenic Acid-producing Endophytic Bacterium

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