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棉花GhDHAR2基因克隆、功能序列分析及原核表达

田大鹏;葛娟;石峰;李鸿彬;   

  1. 石河子大学生命科学学院;石河子大学农业生物技术重点实验室;
  • 出版日期:2012-07-26 发布日期:2012-07-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(30860031);;

  • Published:2012-07-26 Online:2012-07-26

摘要: 通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-DHAR家族的功能结构域;进化树分析显示GhDHAR2和拟南芥AtDHAR2在进化关系上较近。将GhDHAR2基因连接到原核表达载体pET-28a中,将重组载体pET28a-GhDHAR2转入到表达菌株BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达出重组GhDHAR2蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示重组蛋白大小约为28 kD,诱导表达的重组蛋白具有较高的DHAR活性。首次克隆了棉花GhDHAR2基因,通过结构域分析其可能的作用,并成功进行蛋白体外表达及酶活性分析。

关键词: 棉花, 脱氢抗坏血酸还原酶基因克隆, 原核表达, DHAR酶活力