银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析

银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析

刘云华;周秋虎;张灵芝;常振战;

黑龙江生态工程职业学院生物技术系;北京大学基础医学院生物物理系;北京大学药学院天然药物学系;

出版日期:2012-08-26 发布日期:2012-08-26
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(31070650);;

Published:2012-08-26 Online:2012-08-26

摘要/Abstract

摘要： 植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性。

关键词: 银胶菊(Parthenium argentatum), 丙二烯氧化物合成酶, 细胞色素P450, 表达纯化, 酶活性分析

刘云华;周秋虎;张灵芝;常振战;. 银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析[J]. .

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