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大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表达

田智蕊;韩红;武志海;李东哲;杨美英;   

  1. 吉林农业大学;
  • 出版日期:2012-09-26 发布日期:2012-09-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31171478);;

  • Published:2012-09-26 Online:2012-09-26

摘要: 以盐诱导后的大豆根为材料,提取总RNA,RT-PCR得到GmOLPa目的片段。对其蛋白序列分析表明,该蛋白属于GH64-TLP-SF同源超家族中的PR-5蛋白,第25-244位氨基酸是其保守结构域,与番茄中的PR-5亲缘关系最为接近。构建GmOLPa基因ORF的原核表达载体pET-28-GP,并对其在大肠杆菌BL21中的表达条件进行优化。SDS-PAGE证实重组质粒能够在大肠杆菌BL21中表达,目的蛋白分子量约为30 kD,最佳诱导时间为4 h,最佳IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L。

关键词: PR-5蛋白, GmOLPa蛋白, 基因克隆, 蛋白序列分析, 原核表达