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家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表达和抗体制备

李国辉;王鹏;胡朝阳;姚勤;   

  1. 江苏大学生命科学研究院;
  • 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31000080);;

  • Published:2012-11-26 Online:2012-11-26

摘要: 通过PCR扩增家蚕二分浓核病毒(Bombyx moribidensovirus,BmBDV)VD1-ORF4基因序列中的两个DNA片段,将测序正确的两个目的片段分别亚克隆到原核表达载体pET-30a上,通过不同浓度的IPTG对含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,这两个截短多肽都获得了表达,其N-端融合有6个组氨酸。将割胶纯化的蛋白多肽与佐剂充分研磨,以研磨后的匀浆液对昆明小鼠进行皮下多点注射。获得的抗血清分别对原核诱导表达产物进行Western blot分析,结果表明,在特定的位置都能杂交到一条特异的蛋白带,表明制备的两个多抗能为深入研究VD1-ORF4基因的功能提供基础。

关键词: 家蚕二分浓核病毒, VD1-ORF4, 原核表达, 融合蛋白, 抗体制备