Ezrin 多克隆抗体制作及应用

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (1): 129-133.

Ezrin 多克隆抗体制作及应用

张宏玲, 万骏, 严飞, 张新胜, 曹威, 陶伟, 黄来强

1. 清华大学生命科学学院，北京 100084 ；2. 清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室，深圳 518055

收稿日期:2012-08-24 修回日期:2013-01-31 出版日期:2013-01-30 发布日期:2013-01-30
作者简介:张宏玲，女，博士研究生，研究方向：细胞生物学；E-mail: zhanghl08@mails.tsinghua.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目（30570960，30900749），深圳市重点实验室建设与提升计划

The Production and Application of Ezrin Polyclonal Antibody

Zhang Hongling, Wan Jun ,Yan Fei ,Zhang Xinsheng,Cao Wei, Tao Wei ,Huang Laiqiang

1. School of Life Sciences，Tsinghua University，Beijing 100084;
2. The Shenzhen Key Lab of Gene and Antibody Therapy，Center for Biotech & BioMedicine and Division of Life & Health Sciences，Graduate School at Shenzhen，Tsinghua University，Shenzhen 518055

Received:2012-08-24 Revised:2013-01-31 Published:2013-01-30 Online:2013-01-30

摘要/Abstract

摘要： 构建Ezrin 原核重组表达载体pET-28a（+）-ezrin，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，诱导获得Ezrin 蛋白，将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠（KM），获得抗血清，采用ELISA 和Western blotting，免疫荧光测定其效价和特异性。ELISA 对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应；通过Western blotting 对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带，其相对分子量为82 kD，与预测分子量相符；免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin 蛋白，且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G 对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的Ezrin 多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。

关键词: 原核表达纯化 , Ezrin , 蛋白 , 动物免疫 , 抗血清 , 抗体鉴定

Abstract: Constructed Ezrin prokaryotic expression vector pET-28a(+)-ezrin, the recombinant plasmid was transformed into E. coliBL21(DE3), induced Ezrin protein was purified through Ni-chelating affinity chromatography and purified protein was used to immunize NewZealand rabbits and Kunming mice, antiserum was removed. The titer and specificity of anti-sera were determined by ELISA, Western blottingand immunofluorescence. The specificity of the anti-Ezrin antibody was identified by Western blot and immunofluorescence. The results showedthat anti-sera antibody reacted with antigen and detected a specific band of 82 kD, and the size was agreed with the predicted molecular mass,localization dectected by inmmunofluorescence was in good agreement with the references. Finally, the anti-surem was purified by protein G.These results suggested that the Ezrin polyclonal antibody revealed high sensitivity and specificity.

Key words: Prokaryotic expression and purification , Ezrin , Animal immunization , Anti-serum , Polyclonal antibody

张宏玲, 万骏, 严飞, 张新胜, 曹威, 陶伟, 黄来强. Ezrin 多克隆抗体制作及应用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(1): 129-133.

Zhang Hongling, Wan Jun, Yan Fei, Zhang Xinsheng, Cao Wei, Tao Wei, Huang Laiqiang. The Production and Application of Ezrin Polyclonal Antibody[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(1): 129-133.

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