果糖缬氨酸氧化酶在sf9细胞中的表达

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (10): 160-164.

果糖缬氨酸氧化酶在sf9细胞中的表达

徐影,赵雪,于源华

（长春理工大学生命科学技术学院，长春 130022）

收稿日期:2013-04-19 修回日期:2013-10-15 出版日期:2013-10-14 发布日期:2013-10-15
作者简介:徐影，女，硕士研究生，研究方向：分子生物学；E-mail ：dyzxuying@126.com

Expression of Fructose Valine Oxidase in Sf9 Cells

Xu Ying, Zhao Xue, Yu Yuanhua

（College of Life Sciences，Changchun University of Science and Technology，Changchun 130022）

Received:2013-04-19 Revised:2013-10-15 Published:2013-10-14 Online:2013-10-15

摘要/Abstract

摘要：

利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞sf9 中表达果糖缬氨酸氧化酶基因（FVO）。人工合成FVO 基因，与载体pFastBac1 连接，转化至大肠杆菌DH10Bac 感受态细胞，进行同源重组。经筛选得到重组杆状病毒载体Bacmid-pFastBac1-FVO， PCR 鉴定得到单一条带；用该重组载体转染sf9 细胞，收获毒种并进行表达；对表达产物进行SDS-PAGE 、Western blot 检测。成功构建了FVO 的杆状病毒表达载体，并在sf9 细胞中得到了表达，Western blot 检测出现1 条约40 kD 的带。

关键词: 果糖缬氨酸氧化酶, 杆状病毒表达系统, 同源重组, sf9, 细胞真核表达

Abstract:

It was to express the Fructose Valine Oxidase Gene with baculovirus expression system. FVO gene was artificially synthesized, and ligated to the vector pFastBac1 to obtain the recombinant vector, which was then transformed into E.coli DH10Bac competent cells to transposase with bacmid. After screening, the recombinant baculovirus Bacmid-pFastBac1-FVO was got, which appeared a single band after PCR identification. sf9 cells was transfected with the recombinant vector, and harvested the virus and expressed the protein. Results showed that the baculovirus expression vector was successfully constructed and expressed in the sf9 cells which appeared a 40 kD band with Western blot.

Key words: Fructose, Valine oxidase, Baculovirus expressive system, Homologous recombination, Sf9 cell, Eukaryotic expression

徐影,赵雪,于源华. 果糖缬氨酸氧化酶在sf9细胞中的表达[J]. 生物技术通报, 2013, 0(10): 160-164.

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