根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (2): 79-84.

根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究

柳忠玉¹, 赵树进²

1. 长江大学生命科学学院，荆州 434025；2. 广州军区广州总医院，广州 510010

收稿日期:2013-08-19 出版日期:2014-02-27 发布日期:2014-02-27
作者简介:柳忠玉，女，博士，讲师，研究方向：中药生物技术；E-mail：zyliu2004@126.com
基金资助:
广东省自然科学基金（10151001002000012），长江大学博士启动基金项目（801100010122）

Agrobacterium tumefaciens-mediated Transformation of Shoot Tip of Polygonum cuspidatum

Liu Zhongyu¹, Zhao Shujin²,

（1. College of Life Sciences，Yangtze University，Jingzhou 434025；2. General Hospital of Guangzhou Military Command，
Guangzhou 510010）

Received:2013-08-19 Published:2014-02-27 Online:2014-02-27

摘要/Abstract

摘要： 为了建立根癌农杆菌介导的虎杖茎尖遗传转化体系，以虎杖的茎尖为转化受体，研究了携带白藜芦醇合酶基因（PcRS）的根癌农杆菌载体介导的虎杖遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示，较适宜的转化系统为预培养2 d，农杆菌菌液（OD600 值为0.6）侵染10 min，共培养3 d，在含8 mg/L 潮霉素的培养基上诱导不定芽。利用该体系从 300 块茎尖外植体中共转化获得 15株抗性再生植株，经 PCR 和 Southern 杂交检测，有 6 株虎杖的基因组中已整合进了目的基因。

关键词: 虎杖, 茎尖, 根癌农杆菌, 遗传转化

Abstract: In order to establish Agrobacterium tumefaciens -mediated transformation system of Polygonum cuspidatum shoot tip, some key factors that affect transformation frequency of P. cuspidatum shoot tip were studied. The shoot tips of P. cuspidatum was infected by Agrobacterium tumefaciens EHA105 with the plasmid which contains PcRS gene. The superior transformation system was as following, pre-cultured 2 days and then infected 10 minutes in suspension（OD₆₀₀=0.6）, co-cultured 3 days, transgenic tissues and shoots were selected with 8 mg/L hygromycin. Six transgenic plants from 300 explants were obtained and the intergration of transgene was confirmed by PCR and Southern blot analysis.

柳忠玉, 赵树进. 根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究[J]. 生物技术通报, 2014, 0(2): 79-84.

Liu Zhongyu, Zhao Shujin,. Agrobacterium tumefaciens-mediated Transformation of Shoot Tip of Polygonum cuspidatum[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(2): 79-84.

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