红鳍东方鲀干扰素γ基因的原核表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.025

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (12): 174-179.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.025

红鳍东方鲀干扰素γ基因的原核表达

马普¹,孙赛红¹,王玉芳¹,李慧¹,刘海映²,姜志强¹,仇雪梅¹,刘洋¹,张涛³,王秀利¹

1. 大连海洋大学水产与生命学院，大连 116023；2. 大连海洋大学海洋科技与环境学院，大连 116023；3. 大连天正实业有限公司，大连 116011

收稿日期:2015-04-21 出版日期:2015-12-19 发布日期:2015-12-19
作者简介:马普，女，硕士研究生，研究方向:水产动物基因工程；E-mail:mapu88824@sina.com
基金资助:
国家海洋公益性行业科研专项经费项目(201405003-2)，大连市科技计划项目(2014B11NC091)

A Prokaryotic Expression of Recombinant IFNγ from Takifugu rubripes

Ma Pu¹, Sun Saihong¹, Wang Yufang¹, Li Hui¹, Liu Haiying², Jiang Zhiqiang¹, Qiu Xuemei¹, Liu Yang¹, Zhang Tao³, Wang Xiuli¹

1. College of Fisheries and Life Science，Dalian Ocean University，Dalian 116023；2. College of Marine Science and Environment，Dalian Ocean University，Dalian 116023；3. Dalian Tianzheng Industrial Corporation Limited，Dalian 116011

Received:2015-04-21 Published:2015-12-19 Online:2015-12-19

摘要/Abstract

摘要： 旨在探究一种简单高效的获取重组红鳍东方鲀IFNγ蛋白的方法。提取红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)肾脏组织的总RNA，并以其为模板进行RT-PCR扩增干扰素γ(IFNγ)基因序列。将IFNγ成熟肽序列与表达载体pET-32a(+)相连，成功构建了重组表达载体PET-32a-IFNγ。将其转化入E. coli BL21(DE3)感受态细胞后获得了重组表达IFNγ的基因工程菌。经IPTG诱导，pET-32a-IFNγ在BL21中得到了表达。通过对表达产物的纯化和Western blotting检测，结果显示红鳍东方鲀IFNγ基因在大肠杆菌中的表达准确，且目的蛋白表达量较高。

关键词: 红鳍东方鲀, 干扰素γ, 原核表达

Abstract: The aim is to provide a simple and efficient method to acquire recombinant fusion proteins of IFNγ of T. rubripes. In this study, total RNA was extracted from the kidney tissue of T. rubripes, and used as a template to amplify gene sequences of interferon γ(IFNγ)by RT-PCR. The recombinant DNA pET-32a-IFNγ was constructed by ligating the mature peptide sequences of IFNγ and prokaryotic expression vector pET-32a(+). The genetic engineering bacteria of recombinant expressed IFNγ were obtained by transforming pET-32a-IFNγ into the competent cells of Escherichia coli BL21(DE3). The fusion proteins were obtained under the induction of IPTG. By purifying the express products and Western blotting test, the results showed the high-efficiency expression of recombinant pET-32a-IFNγ in E. coli and the accurate target protein.

Key words: Takifugu rubripes, interferon γ, prokaryotic expression

马普,孙赛红,王玉芳,李慧,刘海映,姜志强,仇雪梅,刘洋,张涛,王秀利. 红鳍东方鲀干扰素γ基因的原核表达[J]. 生物技术通报, 2015, 31(12): 174-179.

Ma Pu, Sun Saihong, Wang Yufang, Li Hui, Liu Haiying, Jiang Zhiqiang, Qiu Xuemei, Liu Yang, Zhang Tao, Wang Xiuli. A Prokaryotic Expression of Recombinant IFNγ from Takifugu rubripes[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(12): 174-179.

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红鳍东方鲀干扰素γ基因的原核表达

A Prokaryotic Expression of Recombinant IFNγ from Takifugu rubripes

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