核酸免疫制备鼠抗棉铃虫 FK506 结合蛋白的多克隆抗体

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.023

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (12): 141-146.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.023

核酸免疫制备鼠抗棉铃虫 FK506 结合蛋白的多克隆抗体

朱燕 ,张富春, 马纪, 黄丽娜 ,刘小宁

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046

收稿日期:2014-03-31 出版日期:2014-12-08 发布日期:2014-12-12
作者简介:朱燕，女，硕士研究生，研究方向:分子生物学;E-mail:1069806808@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31260444)，自治区自然基金项目(2012211A018)，公益性行业(农业)科研专项经费项目(200903033)

Preparation of the Polyclonal Antibody Against Helicoverpa armigera FK506 Binding Protein by Immunizing with pcDNA3-FK506BP

Zhu Yan, Zhang Fuchun, Ma Ji, Huang Li’na, Liu Xiaoning

(Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046)

Received:2014-03-31 Published:2014-12-08 Online:2014-12-12

摘要/Abstract

摘要： 利用电注射基因导入法制备小鼠抗棉铃虫 FK506 结合蛋白(FKBP12)的多克隆抗体，并通过 Western blot 验证抗体与抗原的特异性结合。构建重组质粒 pcDNA3-FKBP12 并测序验证序列的正确性，利用基因导入法将重组质粒 pcDNA3-FKBP12 注射到小鼠体内，免疫 4 次后用 ELISA 检测法确定抗体的效价，并对抗体的特异性结合进行 Western blot 以及免疫组化检测。结果表明，小鼠抗 FK506 结合蛋白血清的效价达到 1∶25 600，Western blot 结果显示此抗血清能与融合蛋白 His-FKBP12 结合，免疫组化结果表明在棉铃虫 3 龄幼虫不同组织中 FKBP12 均有表达。说明电注射基因导入法制备的小鼠抗FK506 结合蛋白的抗体在滴度和特异性结合方面都达到预期要求。

关键词: 棉铃虫, FK506, 结合蛋白, 多克隆抗体

Abstract: It was to prepare the polyclonal antibody against FK506 binding protein, which was to be to verified the specificity of the antibody by Western blot. Firstly, recombinant expression plasmid pcDNA3-FKBP12 was constructed and sequenced, and the recombinant plasmid pcDNA3-FKBP12 was then transfered into Kunming mice four times. Finally, ELISA assay, Western blot analysis and immunohistochemistry(IHC)were used to determine the titer of polyclonal antibody of FK506 binding protein and its specificity, respectively. The results showed that the titer of polyclonal antibody reached 1∶25 600, and it was able to bind specifically to both the fusion protein His- FKBP12 and FKBP12 from the different tissues of the cotton bollworm in the 3rd larvae, which laid the foundation for the subsequent experiments.

Key words: Helicoverpa armigera, FK506 binding protein, Polyclonal antibody

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核酸免疫制备鼠抗棉铃虫 FK506 结合蛋白的多克隆抗体

Preparation of the Polyclonal Antibody Against Helicoverpa armigera FK506 Binding Protein by Immunizing with pcDNA3-FK506BP

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