甲胎蛋白的原核表达及复性优化

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.029

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (1): 193-197.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.029

甲胎蛋白的原核表达及复性优化

才蕾矫丽媛王继华唐时幸

（广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510660）

收稿日期:2014-05-07 出版日期:2015-01-09 发布日期:2015-01-10
作者简介:才蕾，女，工程师，博士，研究方向：诊断试剂研发；E-mail：leicai@wondfo.com.cn

Prokaryotic Expression of Alpha Fetoprotein and Optimization of Renaturation

Cai Lei, Jiao Liyuan, Wang Jihua, Tang Shixing

（Guangzhou Wondfo Biotech Co.，Ltd，Guangzhou 510660）

Received:2014-05-07 Published:2015-01-09 Online:2015-01-10

摘要/Abstract

摘要： 构建甲胎蛋白的原核表达载体pET32a-AFP，对包涵体形式表达的甲胎蛋白进行复性优化。将构建的重组质粒pET32a-AFP转化入E.coli，IPTG诱导表达后，经亲和层析纯化获得AFP包涵体，通过对复性过程、pH、添加剂等的研究摸索，获得最佳复性条件。当采用添加0.5 mol/L L-精氨酸的一步法透析复性方法，且透析液pH值为8.5，重组人AFP包涵体蛋白起始浓度为1.0 mg/mL时，复性效率最高。该复性方法获得蛋白质具有较高的回收率且操作简便。

关键词: 甲胎蛋白, 原核表达, 复性

Abstract: Plasmid pET32a-AFP was constructed to express recombinant human alpha fetoprotein, which was in the form of inclusion body, and the protein was obtained after renaturing optimization. The recombinant plasmid pET32a-AFP was transformed in E.coli, after induced by IPTG and purified by affinity column, the inclusion body was renatured under different conditions, including renature method, pH and addictives. The results showed that it had the highest renature efficiency when 1.0 mg/ml AFP was processed under one-step dialysis renature method and the pH is 8.5, with 0.5 mol/L L-Arg. This renature process made the recombinant AFP protein having the highest efficiency and easy to manipulate.

Key words: alpha-fetoprotein, prokaryotic expression, renaturation

才蕾,矫丽媛,王继华,唐时幸. 甲胎蛋白的原核表达及复性优化[J]. 生物技术通报, 2015, 31(1): 193-197.

Cai Lei, Jiao Liyuan, Wang Jihua, Tang Shixing. Prokaryotic Expression of Alpha Fetoprotein and Optimization of Renaturation[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(1): 193-197.

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Prokaryotic Expression of Alpha Fetoprotein and Optimization of Renaturation

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