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正常人肝细胞cDNA文库的构建及应用分析

栾慎顺;张敬武;刘恒贵;   

  1. 沈阳农业大学,沈阳药科大学,中国科学院微生物研究所 沈阳110161,沈阳110016,北京100101
  • 出版日期:2007-12-26 发布日期:2007-12-26

  • Published:2007-12-26 Online:2007-12-26

摘要: 目的利用Gubler-Hoffman法构建了正常人肝细胞的cDNA文库以筛选肝细胞内部与乙肝病毒感染相关的基因。方法首先采用TRIzol法提取正常人肝细胞总RNA,纯化mRNA。逆转录合成单链cDNA,然后合成双链cDNA。用Spin Column回收0.4kb以上片段,然后与Vector pAP3neo进行连接,利用电刺激转化法导入E.coliDH10B,利用PCR法检测文库的重组效率。结果扩增后的文库重组率为93.3%。结论已经成功地构建了正常人肝组织的cDNA文库,该文库可用于筛选与乙肝相关的基因及用于基因芯片的制作。

关键词: cDNA文库, 肝, 乙肝病毒