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p53基因表达沉默的稳定Vero细胞系的建立及特性分析

刘超;邱亚峰;沈阳;刘庆伟;马志永;   

  1. 中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室;
  • 出版日期:2010-07-26 发布日期:2010-07-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金青年基金(30700593);; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2006JB06,2010JB20)

  • Published:2010-07-26 Online:2010-07-26

摘要: 利用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立稳定沉默p53基因的Vero细胞模型。设计针对p53基因的shRNA序列,构建p53shRNA慢病毒载体并感染Vero细胞;嘌呤霉素筛选阳性细胞,局部消化法挑选细胞克隆;利用RT-PCR和West-ernblot检测p53的表达水平;利用虫荧光素酶报告系统,分析p53的转录激活功能。RT-PCR和Westernblot结果显示,慢病毒介导的shRNA有效地沉默p53基因表达;与对照组细胞相比,干扰组细胞的p53的转录激活功能明显降低。慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了p53基因的表达,同时,有效地降低了p53的转录激活功能,为研究p53的生物学功能提供了有利的工具。

关键词: p53, 慢病毒载体, RNA干扰, 筛选, 细胞系