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巨噬细胞特异性启动子/抗菌肽PR39基因腺病毒载体的构建及其表达

余雪梅;文阳安;李朴;孔飞飞;陈光辉;邱欣欣;涂植光;   

  1. 重庆医科大学医学检验系;
  • 出版日期:2010-10-26 发布日期:2010-10-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30600790)

  • Published:2010-10-26 Online:2010-10-26

摘要: 旨在构建由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,检测目的基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。PCR扩增巨噬细胞启动子/抗菌肽PR39成熟肽基因序列,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack中,重组穿梭质粒(pAdTrack-SP/PR39)与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒载体(pAd-SP/PR39)。pAd-SP/PR39经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-SP/PR39)。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。成功构建了由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体。包装出的重组腺病毒仍然能感染小鼠巨噬细胞且高效表达抗菌肽PR39。构建的重组腺病毒能够在巨噬细胞中表达抗菌肽PR39基因,为靶向表达抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用奠定了基础。

关键词: 抗菌肽, PR39, 腺病毒载体, 胞内菌