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肉葡萄球菌tat-gfp融合基因的构建与表达

于长燕;郑秀;朱燕;孟庆艳;王梦晓;高强;   

  1. 天津科技大学生物工程学院工业微生物教育部暨天津市重点实验室;天津科技大学后勤服务集团;
  • 出版日期:2011-08-26 发布日期:2011-08-26
  • 基金资助:
    国家“973”项目(2007CB714305,2011CB707401);;科技部国际合作计划项目(2007DFB31620);; 天津市自然科学基金重点项目(08JCZDJC15100)

  • Published:2011-08-26 Online:2011-08-26

摘要: 将PCR扩增的肉葡萄球菌铁离子过氧化物酶基因(fepB)的双精氨酸转运(Tat)信号肽DNA序列与绿色荧光蛋白基因(gfp)亚克隆到pCX9质粒中构建可表达的tat-gfp融合基因,再将形成的pCX19-Tat-GFP质粒电转化转入肉葡萄球菌宿主中。提取阳性克隆子质粒进行酶切验证,表明表达载体pCX19-Tat-GFP成功地构建并转化。用木糖诱导重组菌株后,分别使用荧光显微镜和SDS-PAGE检测外源GFP蛋白的表达分泌情况。结果显示,菌体能够发出绿色的荧光,且蛋白电泳能够在细胞质与细胞壁组分中检测到GFP蛋白条带,表明肉葡萄球菌宿主可以将表达载体pCX19-Tat-GFP表达的GFP在细胞质中正确折叠,并以活性形式转运到细胞壁部分。

关键词: 肉葡萄球菌, 双精氨酸转运(Tat), 信号肽, 融合基因, 绿色荧光蛋白(GFP), 质粒