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盐藻酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活鉴定

李照熙;杨瑞;林艳;杨保胜;王天云;   

  1. 新乡医学院生命科学技术系;新乡医学院生物化学与分子生物学教研室;
  • 出版日期:2011-12-26 发布日期:2011-12-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(30970055)

  • Published:2011-12-26 Online:2011-12-26

摘要: 构建用于杜氏盐藻核基质结合区结合蛋白(matrix attachment region binding protein,MBP)酵母双杂交试验的诱饵载体,进行自激活及毒性验证。以含有盐藻MBP质粒为模板,经PCR扩增后连接pMD18-T载体,经测序鉴定正确后,EcoRNde双酶切获得目的基因MBP,克隆入经同样双酶切的酵母载体pGBKT7,转化酵母菌株AH109及Y187,检测其自激活以及毒性。结果显示,成功扩增出盐藻MBP基因,重组质粒pGBKT7-MBP经酶切、测序表明序列正确,转化酵母菌株无自激活,无毒性。

关键词: 核基质结合区结合蛋白, 酵母双杂交, 诱饵载体, 自激活