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HeLa细胞cDNA文库及酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308的构建

田颖新;王春苗;刘雪晴;贾晓晖;贾天军;   

  1. 河北北方学院病原生物学实验室;
  • 出版日期:2012-03-26 发布日期:2012-03-26

  • Published:2012-03-26 Online:2012-03-26

摘要: 旨在利用酵母双杂交系统构建HeLa细胞的cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CPn0308。从HeLa细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的HeLa细胞酵母GAL4 AD融合cDNA文库。应用PCR技术扩增目的片段CPn0308,并成功克隆该基因到诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化酵母菌株AH109后,检测诱饵载体有无自激活和细胞毒性作用。结果显示,文库展现良好的多态性,重组诱饵载体pGBKT7-CPn0308不具有毒性且未自主激活报告基因,说明该文库和诱饵质粒可用于酵母双杂交系统。

关键词: HeLa细胞, cDNA文库, pGBKT7-CPn0308, 酵母双杂交, 自激活