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德国小蠊变应原Bla g 8的克隆表达及进化分析

龙高群;张春林;   

  1. 贵阳医学院生物教研室;
  • 出版日期:2012-09-26 发布日期:2012-09-26
  • 基金资助:
    贵州省社发攻关项目(黔科合S系[2007]1038);;

  • Published:2012-09-26 Online:2012-09-26

摘要: 通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。

关键词: 德国小蠊, 变应原, 序列分析, 原核表达