毕赤酵母新启动子GCW14 在细胞表面展示CALB 中的应用

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (4): 129-135.

毕赤酵母新启动子GCW14 在细胞表面展示CALB 中的应用

张轩薇叶燕锐刘晓肖鲁柳柳林影

华南理工大学生物科学与工程学院，广州 510006

收稿日期:2012-10-17 修回日期:2013-04-22 出版日期:2013-04-22 发布日期:2013-04-22
作者简介:张轩薇，女，硕士研究生，研究方向：发酵工程；E-mail ：zhangxuanwei88@yahoo.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目（20976062，31170031），广东省自然科学基金项目（S2011020001457）

Application of Pichia pastoris Original Constitutive Strong Promoter GCW14 in Candidn antarctic Lipase B Yeast Surface Display

Zhang Xuanwei, Ye Yanrui, Liu Xiaoxiao, Lu Liuliu, Lin Ying

College of Biology Science and Technology，South China University of Technology，Guangzhou 510006

Received:2012-10-17 Revised:2013-04-22 Published:2013-04-22 Online:2013-04-22

摘要/Abstract

摘要： 以毕赤酵母内源壁蛋白G_cw14_p 为锚定蛋白，分别以新的内源组成型启动子P_GCW14 与诱导型启动子P_AOX1、组成型启动子P_GAP 和P_TEF14 种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）展示于毕赤酵母细胞表面，通过检测4 种重组细胞的CALB 酶活比较这4 个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示，P_GCW14 的启动子活性与P_AOX1 相当，最高菌体酶活力分别在发酵48 h 和168 h 时达到694.8 U/g（Dry cell weight）和684.3 U/g（Dry cell weight），以P_GCW14 为启动子的重组菌产酶周期大大缩短；组成型启动子 P_GAP 和P_TEF1 的最高菌体酶活分别在发酵24 h 和168 h 达到266.7 U/g（Dry cell weight）和449.2 U/g（Dry cell weight），可见_PGCW14 的启动子活力性要高于P_GAP 和P_TEF1。此外，以P_GCW14 为启动子，利用壁蛋白G_cw14p 自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。

关键词: 巴斯德毕赤酵母, 启动子, 南极假丝酵母脂肪酶B, 酵母表面展示

Abstract: To compare the transcription activity of original promoter P_GCW14 with other promoters, Candidn antarctic lipase B（CALB） was displayed on the cell surface of Pichia pastoris using P_GCW14, P_AOX1, P_GAP and P_TEF1 as promoter respectively. Anchor protein was a cell wall protein named G_cw14p, which was obtained originally from P. pastoris. In shake-flask cultivation, the activity of P_GCW14 was equal to that of _PAOX1.Under control of P_GCW14 and P_AOX1, the highest lipase hydrolytic activities of recombinant yeasts reached 694.8 U/g（Dry cell weight）and 684.3 U/g（Dry cell weight）after cultivation for 48 h and 120 h, respectively. The fermentation period of recombinant yeast using P_GCW14 as promoter was shortened significantly. While the highest lipase hydrolytic activities of recombinant yeasts controlled by constitutive promoter P_GAP and P_TEF1 reached 266.7 U/g（Dry cell weight）and 449.2 U/g（Dry cell weight）respectively after cultivation for 48 h. This means that the activity of P_GCW14 was higher than that of P_GAP and PTEF1. Furthermore, replacing the α-factor with signal peptide from protein G_cw14p, the lipase hydrolytic activity increased about 4%.

Key words: Pichia pastoris, Promoter, Candidn antarctic lipase B, Yeast cell-surface display

张轩薇叶燕锐刘晓肖鲁柳柳林影. 毕赤酵母新启动子GCW14 在细胞表面展示CALB 中的应用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(4): 129-135.

Zhang Xuanwei, Ye Yanrui, Liu Xiaoxiao, Lu Liuliu, Lin Ying . Application of Pichia pastoris Original Constitutive Strong Promoter GCW14 in Candidn antarctic Lipase B Yeast Surface Display[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(4): 129-135.

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