大肠杆菌sdaA、sdaB、pgpB 基因的敲除及其对磷脂酰丝氨酸合成的影响

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (4): 123-128.

大肠杆菌sdaA、sdaB、pgpB 基因的敲除及其对磷脂酰丝氨酸合成的影响

佟新伟杨泓喆李玉路福平

天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室工业酶国家工程实验室天津市工业微生物重点实验室，天津 300457

收稿日期:2012-10-16 修回日期:2013-04-22 出版日期:2013-04-22 发布日期:2013-04-22
作者简介:佟新伟，男，硕士研究生，研究方向：微生物与生化药学；E-mail ：tlb2010@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（21076159），国家“863” 项目（2011AA100905-4），长江学者和创新团队发展计划项目（IRT1166）

The Effect on Phosphatidylserine Biosynthesis of Gene sdaA，sdaB，pgpB in Escherichia coli

Tong Xinwei, Yang Hongzhe, Li Yu, Lu Fuping

Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology，Ministry of Education，National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes， Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology，The College of Biotechnology， Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457

Received:2012-10-16 Revised:2013-04-22 Published:2013-04-22 Online:2013-04-22

摘要/Abstract

摘要： 利用Red 同源重组技术敲除大肠杆菌sdaA、sdaB 和pgpB 基因，阻断大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成途径中的底物L-丝氨酸和磷酸乙醇酸的部分分解代谢，以达到提高磷脂酰丝氨酸在菌体内含量的目的。将出发菌株和重组菌株进行摇瓶发酵，发酵1 000 min 后，采用高效液相色谱法分析磷脂酰丝氨酸的产量。试验结果表明sdaA、sdaB、pgpB 基因敲除后，磷脂酰丝氨酸在菌体总磷脂中的含量提高了一倍多，说明通过基因工程手段改变大肠杆菌中磷脂酰丝氨酸合成的部分代谢途径，初步获得磷脂酰丝氨酸产量提高的菌株，具有较好的应用前景。

关键词: 大肠杆菌, 基因敲除, 磷脂酰丝氨酸, Red, 重组系统, 高效液相色谱

Abstract: The gene sdaA, sdaB, pgpB were deleted in Escherichia coli by the technology of Red homologous recombination system, resulting in the cut-off of part of the L-serine and PGP catabolic pathway, then the levels of phosphatidylserine（PS）could be elevated. To assess the effects of sdaA, sdaB, pgpB deletion on PS accumulation, both the recombinant and recipient strains were cultivated in LB-containing flasks. Then the samples were taken after 1 000 minutes and quantification of PS performed with HPLC. The results showed that the recombinant E. coli cells produced PS one fold more than the wild-type strain, suggesting the effectiveness of targeted alteration of the metabolic pathways of PS for improvement of PS production. Cost-effective large-scale production of PS should find important applications in various industrial fields.

Key words: Escherichia coli, Gene knockout, Phosphatidylserine, Red homologous recombination system, HPLC

佟新伟杨泓喆李玉路福平. 大肠杆菌sdaA、sdaB、pgpB 基因的敲除及其对磷脂酰丝氨酸合成的影响[J]. 生物技术通报, 2013, 0(4): 123-128.

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