重组牛乳源金黄色葡萄球菌黏附因子FnbpA A 功能区的表达与鉴定

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (4): 136-139.

重组牛乳源金黄色葡萄球菌黏附因子FnbpA A 功能区的表达与鉴定

苏艳¹, 王世民¹, 李莹¹, 韦海娜¹, 邵俊高¹, 张宝江¹, 殷涛²

1. 新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052 ；2. 新疆兵团兽医总站，乌鲁木齐 830000

收稿日期:2012-09-21 修回日期:2013-04-22 出版日期:2013-04-22 发布日期:2013-04-22
作者简介:苏艳，女，副教授，研究方向：细菌分子致病和免疫；E-mail ：2006au @163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31160191，31260222），新疆维吾尔自治区普通高校重点学科基础兽医学科项目

ELISA Expression and Identification of Recombinant A Domain of Adhesin Fnbp A from Staphylococcus aureus in Bovine Milk

Su Yan¹, Wang Shimin¹, Li Ying¹, Wei Haina¹, Shao Jungao¹, Zhang Baojiang¹, Yin Tao²

1. College of Veterinary Medicine，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052 ； 2. Xinjiang Corps Veterinary Station，Urumqi 830000

Received:2012-09-21 Revised:2013-04-22 Published:2013-04-22 Online:2013-04-22

摘要/Abstract

摘要： 黏附素分子FnbpA（纤连蛋白结合蛋白A，fibronectin binding protein A）是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子，也是一个重要的免疫靶标。由于不同地区流行的菌株产生的黏附素有一定的差异，将分离自新疆地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌黏附素分子FnbpA 的A 功能区亚克隆至pGEX 原核表达载体并转入BL21 中诱导表达，SDS-PAGE 分析表明，切除GST 标签后在63 kD 处出现特异性条带。纯化切除GST 标签的蛋白经弗氏佐剂乳化免疫试验兔。ELISA 方法检测免疫兔的抗体效价并评估抗体和葡萄球菌结合能力，结果表明，目的蛋白的抗体效价可达6.7×10⁶，并可在体外识别菌体抗原。

关键词: 金黄色葡萄球菌, FnbpA, 原核表达, 蛋白纯化, 免疫原性

Abstract: Fibronectin binding protein A plays an important role in Staphylococcus aureus early infection, and is also a potential target of immunization. We subcloned the A domain of FnbpA into the prokaryotic expression vector pGEX and transformed it to the BL21 host cell. After removing the GST tag the purified purpose protein was analyzed by SDS-PAGE and approximately 63 kD exogenous protein was observed by SDS-PAGE. The purified protein without GST tag was emulsified by Freund’s adjuvant and injected rabbits subcutaneously to produce hyperimmune serum. The antibody titer and the binding capacity between the S. aureus and rabbit serum were tested by ELISA. The result indicated the antibody titer could reach 6.7×10⁶ and the antibody could recognize the antigen of S. aureus in vitro.

Key words: S. aureus, FnbpA, Prokaryotic expression, Protein purification, Immunogenicity ELISA

苏艳, 王世民, 李莹, 韦海娜, 邵俊高, 张宝江, 殷涛. 重组牛乳源金黄色葡萄球菌黏附因子FnbpA A 功能区的表达与鉴定[J]. 生物技术通报, 2013, 0(4): 136-139.

Su Yan, Wang Shimin, Li Ying, Wei Haina, Shao Jungao, Zhang Baojiang, Yin Tao. ELISA Expression and Identification of Recombinant A Domain of Adhesin Fnbp A from Staphylococcus aureus in Bovine Milk[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(4): 136-139.

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