生物技术通报

甘薯转基因研究进展

李志亮, 吴忠义, 王玉文, 邢浩春, 叶嘉, 张秀海, 黄丛林

2013, 0(9): 1-6.

摘要 ( 321 )

PDF (1168KB) ( 1768 )

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甘薯是重要的粮食、饲料和工业原料作物，同时也是新型的高能源作物。综述甘薯植株再生体系的建立及转抗除草剂、抗逆、抗病毒、抗病、抗虫、品质改良等基因方面的研究进展。此外，还对转基因甘薯的发展前景作简要展望。

植物hpRNA干扰载体构建的研究进展

言普, 沈文涛, 黎小瑛, 周鹏

2013, 0(9): 7-12.

摘要 ( 339 )

PDF (3632KB) ( 2370 )

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RNAi技术在基因功能鉴定和功能基因表达调控中发挥着重要作用。hpRNA干扰载体被广泛用于植物的RNAi研究。对植物hpRNA干扰载体的构建方法进行综述，并分析其优缺点，为植物hpRNA干扰载体构建方法的选择提供参考。

微生物蛋白与转基因作物蛋白等同性比较

崔浩然, 郎志宏, 朱莉, 汪海, 黄大昉

2013, 0(9): 13-17.

摘要 ( 278 )

PDF (3082KB) ( 865 )

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转基因作物的风险性评估一般需要大量的转基因蛋白，但是人们很难从转基因作物中表达纯化出足够量的蛋白。然而，人们可以通过微生物过表达系统获得大量的纯化蛋白，如果可以用微生物蛋白来代替转基因蛋白进行风险性研究，就可以解决这一难题，但是微生物蛋白与转基因蛋白必须在生化特性与功能特性上具有等同性。简要介绍一套典型的比较微生物蛋白和转基因蛋白等同性的方法，为利用微生物蛋白进行转基因作物的风险性评估提供参考。

植物病原细菌链霉素抗性研究进展

李洁, 钟杰, 黄军, 赵晓, 朱宏建

2013, 0(9): 18-26.

摘要 ( 319 )

PDF (1197KB) ( 1586 )

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为了解植物病原细菌链霉素抗性基因出现、转移的原因及如何延缓抗性发展，综述植物病原细菌链霉素的抗性机制，抗性基因的分布、转移及抗性基因的检测方法，初步探讨抗药性的发展原因及对环境和人类的影响，并就如何延缓抗药性的发展提出建议和措施。

丁酸梭菌的研究应用进展

张善亭, 史燕, 张淑丽, 王海宽

2013, 0(9): 27-33.

摘要 ( 782 )

PDF (1194KB) ( 4915 )

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丁酸梭菌是从健康人和动物肠道中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，因其能够产生芽孢的益生功能被广泛的研究。丁酸梭菌作为新一代芽孢益生菌制剂，较非芽胞益生菌制剂具有耐热、耐酸和耐多种抗生素等生物学特性，能对宿主产生各种健康作用。如调节肠道微生态平衡、稳定胃肠道功能、产生益生物质、提高机体免疫及促进动物生长等，具有更好的应用发展前景。主要对丁酸梭菌的生物学功能、发酵工艺及其在临床与动物饲料中的应用研究进展进行综述，并展望丁酸梭菌今后的研究方向。

Nrf2及其相关抗氧化基因的miRNA调控研究进展

覃玉娥, 刘朝奇

2013, 0(9): 34-37.

摘要 ( 340 )

PDF (1197KB) ( 1918 )

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Nrf2在机体抗氧化、维护机体正常生理功能具有重要作用。MicroRNAs（miRNAs）是真核生物中调控基因表达的一类内源性非编码RNA，其大小长约20-25个核苷酸。围绕机体抗氧化相关基因调控的miRNA最新研究进展作一综述。

TSC1/TSC2二聚体及其在细胞生长调控中的作用

秦毅, 王彦凤, 王志钢

2013, 0(9): 38-42.

摘要 ( 395 )

PDF (1430KB) ( 2028 )

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Tsc1和Tsc2是常染色体基因，在体内作为抑癌基因广泛表达，表达产物Hamartin/TSC1和Tuberin/TSC2直接相互作用形成异二聚体（TSC1/TSC2）而起作用。Tsc1和Tsc2突变可导致一种显性遗传性多系统并发症，即复合型结节性硬化症（tuberous sclerosis complex，TSC），具有很高的表现度和多样的并发表征，成人和小孩分别有1/8 000和1/6 000的几率受到TSC的影响。TSC1/TSC2能响应生长因子、胰岛素及各类环境胁迫信号，并发挥其靶向小G蛋白Rheb的GAP（GTPase active protein，GAP）活性，经由Rheb/mTORC1（mammalian target of rapamycin complex1）模式信号途径来调控细胞生长、分化及迁移并在胚胎发育及机体代谢过程中发挥重要的功能。综述Tsc1和Tsc2 的分子遗传特性及其产物TSC1/TSC2在细胞生长调控中的作用。

IGFs及其信号通路研究进展

李聪, 马凯丽, 刘增力, 王志钢

2013, 0(9): 43-46.

摘要 ( 425 )

PDF (1183KB) ( 1503 )

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胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors，IGFs）是一个多功能的生长因子家族，对细胞的生长、分化和凋亡起着重要的调节作用。概述近年来在IGFs的成分、结构功能、信号通路以及在疾病中的作用等方面的研究进展，以期为细胞生长调控、动物胚胎发育及肿瘤发生等方面的研究提供参考。

全基因组DNA甲基化图谱及其在动物遗传育种中的研究进展

赵敬贤, 张路培, 高会江, 李俊雅, 许尚忠, 高雪

2013, 0(9): 47-53.

摘要 ( 278 )

PDF (1180KB) ( 2041 )

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DNA甲基化是真核生物表观遗传学重要的机制之一。近年来，全基因组DNA甲基化在动植物遗传育种领域的研究引起了人们广泛的关注。访问大量基因或整个基因组的甲基化状态的能力将会大大促进对细胞中基因调控性质，以及细胞和环境间相互作用的表观遗传机制的理解。从DNA甲基化图谱、DNA甲基化图谱的构建、DNA甲基化图谱及在动物上的研究进展等方面进行简要综述，并对DNA甲基化图谱的前景进行简要探讨。

Caspase细胞凋亡通路及其在水生无脊椎动物的研究进展

和四梅, 张丽莉, 王艺磊, 王国栋

2013, 0(9): 54-61.

摘要 ( 298 )

PDF (2013KB) ( 2048 )

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半胱天冬氨酸酶（caspase）普遍存在于真核生物，在细胞凋亡中具有重要作用，广泛参与胚胎发育、炎症反应、器官发生、变态过程及自稳态维持等多种生理过程。caspase级联反应将细胞外信号传递到细胞内，水解底物蛋白或激活转录因子发挥作用。目前，细胞凋亡通路在哺乳动物的作用机制已有大量的报道，但对水生无脊椎的研究相对较少。综述caspase细胞凋亡通路及其在水生无脊椎动物的研究进展。

一种改进后的重叠延伸PCR法对被孢霉重组载体的构建

孟祥亮, 王宁新, 牛丽华, 李培光, 李洋, 黄大卫

2013, 0(9): 62-67.

摘要 ( 321 )

PDF (5217KB) ( 1868 )

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为了提高DNA大片段的拼接效率，通过引入逐次退火的PCR的方法，改良了传统的重叠延伸PCR方法。逐次退火PCR法，一方面延长了重叠区的PCR引物长度；另一方面把原来在1个循环中1个退火温度改成若干个，逐次降低退火温度，适用于Tm值相差比较大的引物；相邻的退火温度之间相差3-6℃。结果显示，通过此种方法成功拼接了ω3（2）和HCT两个大片段；PCR产物电泳条带单一，克隆测序证实序列完全正确，可以直接应用于后续试验。这种改进后的方法可以有效减少非特异性扩增，提高灵敏度，把这种方法称之为逐次退火重叠延伸PCR。

不同色彩矮牵牛DFR基因的克隆与生物信息学分析

朱奇朗, 李晓波, 肖向文, 李雪源, 黄先忠, 郑巨云, 艾先涛

2013, 0(9): 68-76.

摘要 ( 290 )

PDF (6564KB) ( 1238 )

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二氢黄酮醇4-还原酶基因（DFR）是花色素合成途径中的一个关键基因。以新疆种植的白、红和蓝色矮牵牛为试验材料，通过同源克隆的方法从花中克隆到3个完整的DFR基因的全长编码序列（CDS），与已知的矮牵牛DFR基因（GenBank登录号：X15537）序列的相似性分别为97.79 %、96.59%和 97.99%，分别命名为PhDFR1，PhDFR2和PhDFR3；3个基因编码380个氨基酸，同已知矮牵牛DFR基因编码的蛋白（GenBank登录号：CAA33544）的同源性分别是95.53%、94.21%和95.79%；生物信息学分析表明，3个蛋白均具有NADB- Rossmann家族中高度保守的NADPH结合位点、底物特异性结合位点。3个矮牵牛品种DFR都不具有信号肽，为亲水蛋白，定位于细胞质的可能性最高；均具有两个跨膜结构，α-螺旋和β-折叠是3个DFR的主要二级结构元件，并且形成了β-α-β-α-β的Rossmann折叠，整本上呈对称分布。利用同源建模分析3个DFR蛋白与已知葡萄的DFR晶体结构有很高的相似性。系统进化树分析表明，PhDFR1、PhDFR2、PhDFR3与已知矮牵牛DFR蛋白亲缘关系最近。

盐藻小G蛋白基因（DsRab）的克隆及在高盐胁迫下的表达分析

余祝君, 柴晓杰, 张晓琳, 张婷, 薛飞

2013, 0(9): 77-83.

摘要 ( 256 )

PDF (4707KB) ( 887 )

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采用RT-PCR和RACE技术扩增了杜氏盐藻小G蛋白基因cDNA全长序列（GenBank Accession No. JN989548），命名为DsRab，对其进行生物信息学分析，并通过实时荧光定量PCR方法检测盐胁迫下该基因的表达情况。结果表明，DsRab基因的cDNA全长为1 299 bp，开放阅读框（ORF）为612 bp，编码203个氨基酸，5'非编码区78 bp，3'非编码区609 bp；保守性结构域分析可知编码的小G蛋白有4个GTP/GDP保守结构域，1个效应区、1个羧基端的半胱氨酸结构域和5个Rab亚家族共有的结构域；二级结构预测表明该蛋白有32.02%的α-螺旋，23.65%的伸展片段，44.33%的自由卷曲，三维建模成功；比对分析发现DsRab蛋白与多种生物的Ypt/Rab的氨基酸序列具有较高的同源性。荧光定量PCR结果表明，盐藻在高盐（3.0 mol/L）胁迫下，DsRab基因表达量显著上调，1 h后表达量达到最大值，为正常培养下对照组（0 h）的4.9倍，差异极显著（P<0.01）。

野生金龙胆草遗传多样性的RAPD分析及总黄酮成分在局群间的分布特征

刘姗, 孙蓉, 唐自钟, 高静雷, 胡洪利, 陈惠

2013, 0(9): 84-88.

摘要 ( 237 )

PDF (2357KB) ( 725 )

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探索来自18个采集地的金龙胆草RAPD遗传性分析及总黄酮成分在局群间的分布特征。采用筛选的10个随机引物，用NTSYSpc2.1软件计算材料间的Jaccard遗传相似系数（GS），并建立各种间的亲缘关系树形图，并利用紫外分光光度法测试各样品中总黄酮的含量。10个引物共扩出71个DNA 片段，多态性 DNA 片段68个，占总扩增数的97.14%。18个金龙胆草种源可明显聚为2大类。总黄酮含量以攀枝花市范围的样品含量最高。不同种源金龙胆草间具有丰富的遗传多样性，总黄酮含量分布却与遗传聚类的分类有差异，提示今后在金龙胆草选育和道地药材研究上应该从多方面进行考虑。

不同因素对草莓玻璃化试管苗恢复的影响

周书利, 汤浩茹, 陈清, 张晓楠, 于定群

2013, 0(9): 89-93.

摘要 ( 216 )

PDF (1134KB) ( 638 )

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旨在探索草莓玻璃化试管苗恢复措施。以‘丰香’草莓玻璃化试管苗为材料，采用正交设计的方法，在继代培养基中添加不同浓度组合的活性炭、聚乙烯醇和钙离子（氯化钙），研究不同组合对草莓玻璃化试管苗恢复的影响，同时比较恢复后的正常试管苗与原来的玻璃化苗及正常苗的生理生化指标。结果表明，正交设计的9种处理间草莓玻璃化苗的恢复率差异显著，恢复率最高的是处理9（1 g/L活性炭+2 g/L聚乙烯醇+166 mg/L钙离子），恢复率为89.07%，其次是处理4（0.5 g/L活性炭+166 mg/L钙离子），81.05%、处理8（1 g/L活性炭+1 g/L聚乙烯醇），73.87%。方差分析表明，活性炭、聚乙烯醇、钙离子浓度对草莓玻璃化苗恢复的影响都极为显著，影响大小依次是钙离子>活性炭>聚乙烯醇。恢复苗的各项生理生化指标与玻璃化苗差异显著，与正常苗差异不显著。结合各处理对玻璃化苗的恢复率、生理生化指标及增殖系数，综合考虑认为使草莓玻璃化试管苗恢复的最佳处理为处理9。

绒山羊rsb66基因cDNA全编码区的克隆及序列分析

卜祥龙, 胡甜园, 罗奋华, 王珂, 吴应积

2013, 0(9): 94-98.

摘要 ( 209 )

PDF (2235KB) ( 699 )

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圆形精子细胞是雄性动物精子发生过程中主要的细胞之一。rsb66蛋白在生精细胞的细胞周期调控过程中发挥重要的作用。rsb66特异性地表达于圆形精子细胞中，但绒山羊rsb66基因全序列仍未见报道。为了更好地研究绒山羊圆形精子细胞的特性，根据已报道的其他物种rsb66基因的cDNA保守区设计引物，从成年绒山羊睾丸中提取总RNA，采用RT-PCR和分子克隆方法，克隆得到绒山羊rsb66基因cDNA全编码区。测序结果与牛相应核苷酸序列的同源性为97.0%，说明rsb66基因在进化上是高度保守的。

海门山羊MDFI基因SNP及其与体尺性状的关联分析

王春侠, 林加娟, 刘宣宣, 李园, 房兴堂

2013, 0(9): 99-104.

摘要 ( 290 )

PDF (3662KB) ( 808 )

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采用PCR-SSCP和DNA测序技术，检测了18月龄海门母山羊共116只个体的 MDFI基因所有外显子和部分内含子的遗传变异，分析了其遗传多态性和遗传结构，并对该基因的多态位点与海门山羊的体尺性状进行了相关分析。结果表明，在海门山羊 MDFI 基因的外显子3和外显子4共发现了2个SNPs，引起了1个无义突变和1个错义突变。与体尺性状的相关性分析发现，MDFI基因的2个SNPs与海门山羊的体高、胸围和管围有显著相关（P<0.05），可作为海门山羊分子育种的辅助标记。

家蝇14-3-3蛋白基因的cDNA克隆与序列分析

国果, 吴沁怡, 吴建伟, 付萍, 张勇

2013, 0(9): 105-109.

摘要 ( 232 )

PDF (2612KB) ( 782 )

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从家蝇cDNA文库中筛选获得家蝇14-3-3（MD14-3-3）基因DNA序列，以该基因的cDNA文库质粒为模板，PCR方法对MD14-3-3 基因进行扩增，以pET 28a（+）为载体构建重组质粒。采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析。结果表明，MD14-3-3基因ORF全长771 bp，编码257个氨基酸，理论分子量29.35 kD；等电点5.78，属于亲水性的酸性蛋白，含有多种酶的结合位点，有14-3-3家族结构域和活性位点，定位于细胞核中，二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。经PCR、双酶切及NDA测序结果均表明pET 28a（+）- MD14-3-3重组质粒构建成功。

PCR扩增牙釉基因X和Y染色体不同序列鉴定羊早期胚胎性别

马友记, 李海静, 朱化彬, 李发弟

2013, 0(9): 110-113.

摘要 ( 340 )

PDF (1958KB) ( 1055 )

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利用羊牙釉基因特异性引物扩增羊血液、成纤维细胞和胚胎DNA，旨在优化羊早期胚胎性别鉴定的方法。结果表明，利用两温度PCR扩增母羊DNA样品获得1条来自X染色体289 bp产物，PCR扩增公羊DNA样品获得2条产物，其中280 bp扩增产物来自Y染色体，235 bp扩增产物来自X染色体，50头已知性别羊样品鉴定的准确率为100%。试验优化了一种两温度PCR快速鉴别羊及其早期胚胎性别的方法。

河鲈RAPD-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

董艳艳, 胡文革, 路李鹏, 陈登稳, 杨迪, 王艳萍, 韩晶

2013, 0(9): 114-118.

摘要 ( 183 )

PDF (3328KB) ( 648 )

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以河鲈为研究材料，对河鲈RAPD-PCR的反应体系进行优化和适用引物的筛选，采用正交设计方法，选用L₁₇（5⁴）正交表，以河鲈基因组DNA为模板，对影响PCR反应较大的4个因素：Taq酶、Mg^{2+、dNTPs、引物在5个水平上进行优化试验，得到河鲈最优RAPD-PCR反应体系：25 μL反应体系中含有30 ng DNA模板1.5 μL，10 μmol/L引物0.7 μL，10×buffer 2.5 μL，25 μmol/L dNTPs 0.4 μL，5 U Taq酶0.2 μL，2.5 mmol/L MgCl₂ 3.0 μL；利用优化体系从50条引物中筛选得到10条适用引物，并确定了引物的最佳退火温度。}

布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因克隆及番茄转化

王晶妍, 王建英, 玉花, 赵宏宇, 赵亮, 辛翠花, 王彬

2013, 0(9): 119-123.

摘要 ( 211 )

PDF (12333KB) ( 466 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

作为发展可食性疫苗的第一步，将猪源布鲁氏菌蛋白OMP31的编码基因转入番茄，获得了转基因番茄。利用不依赖于连接反应的克隆方法（ligation-independent cloning，LIC）构建了pJG045-Omp31植物表达载体，将此表达载体通过三亲融合法转入农杆菌AGL-0中，用农杆菌介导的植物叶盘转化法转化番茄，并通过对再生植株的基因组中OMP31的编码基因扩增测序，最终筛选出5株转基因番茄。

融合蛋白GGH N端延长类似物的克隆表达、纯化及活性研究

冯均尚, 窦文芳, 张晓梅, 许泓瑜, 史劲松, 许正宏

2013, 0(9): 124-129.

摘要 ( 281 )

PDF (2712KB) ( 1453 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

GGH是人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白（GLP-1A2G）2-HSA的简称，为研究N端添加丙氨酸的修饰对其活性的影响，通过基因工程方法成功构建表达该类似物的工程菌，并纯化得到终产物，完成了初步体外活性检测。首先运用PCR技术扩增出融合蛋白GGH类似物的基因片段，以pPIC9K为表达质粒构建了重组表达质粒，将双酶切和测序验证正确的重组质粒电转至分泌型菌株毕赤酵母GS115，然后经过MD平板筛选获得转化子，利用甲醇诱导表达72 h，SDS-PAGE检测上清产物与未修饰的GGH对比，得到阳性转化子。融合蛋白经过发酵液8 000 r/min离心10 min，0.45 μm的微孔滤膜微滤，采用截留分子量为10 kD的超滤膜超滤20倍，再依次经过Blue Sepharose 6 Fast Flow、Phenyl Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow、Sephadex G-25层析柱。在RINm5f细胞上测cAMP的生成，通过与阳性对照的标准曲线对比发现，A-GGH活性比GGH提高10倍，表现出较好的体外活性。

新疆一支蒿提取物诱导棉铃虫解毒酶P450 CYP6B6的表达规律

何海, 刘宁, 朱燕, 刘小宁

2013, 0(9): 130-135.

摘要 ( 266 )

PDF (1877KB) ( 735 )

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旨在利用实时荧光定量PCR和Western blot分别研究新疆一枝蒿提取物黄酮及萜类对棉铃虫P450 CYP6B6在mRNA水平和蛋白水平上表达的影响。实时荧光定量PCR结果表明，P450 CYP6B6在mRNA水平的表达量受到诱导。时间效应为P450 CYP6B6在处理的12 h时能够被黄酮和萜类提取物显著诱导表达，并且在24 h时表达受到抑制；浓度效应为处理24 h时，黄酮和萜类提取物浓度分别为20 mg/100 g和1 mg/100 g时显著诱导P450 CYP6B6的表达，并且在40 mg/100 g和2 mg/100 g时抑制P450 CYP6B6的表达；Western blot检测结果表明，萜类和黄酮在时间和浓度效应上都能显著诱导P450 CYP6B6蛋白表达，并且蛋白水平在时间与浓度效应中的表达趋势与mRNA水平相似。

毕赤酵母表达重组葡萄糖氧化酶的发酵条件

王帅坤, 郝杰清, 王振伟, 师慧, 孟延发

2013, 0(9): 136-141.

摘要 ( 290 )

PDF (7373KB) ( 752 )

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对甲醇诱导重组Pichia pastoris GS115 mut⁺高效表达黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的条件进行了研究，拟建立一条高效低成本的生产重组葡萄糖氧化酶的工艺路线。通过摇瓶试验对发酵培养基、诱导时机、pH、诱导温度、甲醇诱导浓度等进行了优化，随后进行了50 L发酵罐扩大化培养。结果表明，最适发酵培养基为YEPD培养基，甲醇诱导产酶的最佳时机为菌体对数生长末期，最佳诱导浓度为1%，最适诱导pH范围为6-6.5，最适诱导温度25℃。按优化的条件用50 L发酵罐分批培养酵母14 h，甲醇诱导培养48 h后生物量和酶活性达到最高。菌体终密度达到OD₆₀₀为44，每升发酵液中产酶105 kU，发酵液上清蛋白含量为1 000 mg/L。

西沙野生诺尼种子内生细菌的分离与筛选

程池, 刘洋, 曹艳花, 李辉, 李金霞, 姚粟, 谭望桥,

2013, 0(9): 142-145.

摘要 ( 268 )

PDF (1846KB) ( 1164 )

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通过微生物培养方法首次对我国西沙野生诺尼种子内生细菌进行分离及筛选，共得到20株内生细菌，经形态学观察、16S rDNA扩增及系统发育分析，将其归为变形菌门（Proteobacteria）中的肠杆菌（Enterobacter sp.）、伯克霍尔德氏菌（Burkholderia sp.）和泛菌（Pantoea sp.）3个菌属。

大肠杆菌-枯杆菌穿梭载体的构建及其在蛋白酶基因表达中的应用

杨键, 游志庆, 麦志茂, 李洁, 田新朋, 张偲

2013, 0(9): 146-150.

摘要 ( 292 )

PDF (5577KB) ( 1890 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

利用基因重组技术，以枯草杆菌表达载体pWB980为骨架，插入大肠杆菌的克隆载体pUC18中的抗性基因和复制子，构建穿梭质粒pY980coli。将海洋细菌蛋白酶基因hspa插入pY980coli载体P43启动子下游，导入枯草杆菌WB600中，可实现活性表达。

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）外切葡聚糖酶CelB基因的发掘及功能鉴定

庞浩, 陈燕, 吴倩倩, 刘春宇, 郭媛, 林丽华, 黄日波

2013, 0(9): 151-157.

摘要 ( 286 )

PDF (4886KB) ( 1746 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

从地衣芽孢杆菌的基因组数据中寻找与外切葡聚糖酶相似性高的DNA序列，发现在地衣芽孢杆菌基因组中CelB DNA片段具有很高的序列相似性。在大肠杆菌中对来自地衣芽孢杆菌的CelB基因DNA片段进行表达并纯化蛋白质。CelB蛋白质对纤维素底物具有活性。根据糖基水解酶家族48的保守活性位点设计突变策略对CelB进行突变，突变体丧失对底物的活性，说明它具有糖基水解酶家族48的外切葡聚糖酶的典型活性位点。

两株阿维菌素产量不同的菌株中相关基因的比较

杨晗, 钟娟, 孙丰慧, 舒丹, 罗笛, 谭红

2013, 0(9): 158-164.

摘要 ( 289 )

PDF (9904KB) ( 725 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以阿维菌素（Avermectin）高产菌株Streptomyces avermitilis AV-326及其出发菌株Streptomyces avermitilis AV-95为材料，对基因SAV-940（aveC）和SAV-4584（wblA）进行了克隆测序和比对分析，并进一步应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对两个菌株中这两个基因在不同发酵时期（36、48、120和240 h）的相对表达量进行了定量检测和比较。结果显示，在两个菌株中，基因aveC和wblA各自编码的氨基酸序列完全相同；但两个基因表现出不同的表达模式：在所检测的4个时间点，高产菌株中，基因 aveC的相对表达量均高于出发菌株，而基因wblA的相对表达量在阿维菌素合成阶段均显著低于出发菌株。

鸡法氏囊病毒多表位抗原的表达及免疫特性分析

胡巍, 于妮娜, 张海红, 刘文

2013, 0(9): 165-169.

摘要 ( 275 )

PDF (2186KB) ( 570 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

为进行传染性法氏囊病病毒（IBDV）多表位抗原的原核表达和免疫特性分析，应用重叠延伸PCR技术扩增合成由病毒VP2和VP3蛋白多个表位序列构成的重组抗原基因，并将抗原基因与原核表达载体pBVIL1重组，表达多表位融合抗原，通过与标准抗血清反应和动物免疫分别检测表达抗原的免疫反应性和免疫原性。结果显示，经42℃诱导后，含重组载体的大肠杆菌表达了31 kD的抗原蛋白，Western blot鉴定出现阳性条带，免疫小鼠后，抗血清的滴度为1∶6 400。说明原核表达载体构建成功，大量表达的多表位融合抗原具有IBDV抗原反应性。

重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达

亢中奎, 张晋霞, 姜浩武, 王宏, 宋其芳, 黄建芳, 邓宁

2013, 0(9): 170-176.

摘要 ( 312 )

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旨在通过构建EGFL6的真核表达载体，在HEK293T细胞中进行表达，并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基，探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段，用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段，并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后，瞬时转染HEK293T细胞进行表达，荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示，酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功；EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达；增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖，对肿瘤细胞的促增殖率分别达到（37.79±14.05）%和（30.53±6.31）%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达，结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。

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