Advances in Prokaryotic Expression Gene of Tilapia

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0699

Abstract

Abstract:

As a worldwide economic fish,tilapia contains rich nutrition and is one of the most important fish cultured in freshwater. Prokaryotic expression is a technology that combines foreign genes with the expression vectors by gene cloning technology and transfers the combined genes into expression strains in purpose of translating the goal gene into protein. Specific genes can be translated into protein by this technology,and thus provide basic materials for protein level research of specific genes. With the expansion of tilapia industry,researches on tilapia are increasing deeply,especially the genes related to immunity and growth. Prokaryotic expression has made great contribution to the study of these genes in protein level. However,prokaryotic expression needs the match of a suitable expression vector and host,and inappropriate expression vectors and hosts results in the failure of expression. This paper reviews the studied genes of tilapia by prokaryotic expression,summarizes the genes types,vectors and hosts for prokaryotic expression,as well as the uses and limitations of expressed protein,aiming to offer references for further researches of tilapia genes in protein level.

Key words: prokaryotic expression, tilapia, application value, shortage

HE Yang, YU Qiao-ling, WANG Jun, QIN Chuan-jie, LI Hua-tao. Advances in Prokaryotic Expression Gene of Tilapia[J]. Biotechnology Bulletin, 2021, 37(2): 195-202.

Figures/Tables 1

References 50

[1]	Nations U. World population prospects:the 2012 revision, highlights and advance tables[M]. New York United Nations:Department of Economic & Social Affairs, 2013.
[2]	FAO, The state of world fisheries and aquaculture[M]. Rome:Food and Agriculture Organization of the United Nations, 2012.
[3]	Larsen L, Roney JM. Farmed fish production overtakes beef[M]. Washington:Plan B Updates, 2013.
[4]	FAO. The state of world fisheries and aquaculture-Meeting the sustainable development goals[M]. Rome:Food and Agriculture Organization of the United Nations, 2018
[5]	Jackson DA, Berg SP. Biochemical method for inserting new genetic information into DNA of simian virus 40:Circular SV40 DNA molecules containing lambda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1972,69(10):2904-2909. URL pmid: 4342968
[6]	Cohen SN, Chang ACY, Boyer HW, et al. Construction of biologically functional bacterial plasmids in vitro[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1973,70(11):3240-3244. doi: 10.1073/pnas.70.11.3240 URL
[7]	丁炜东, 曹丽萍, 吴婷婷. 奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究[J]. 生物工程学报, 2006,22(4):561-566. pmid: 16894888
	Ding WD, Cao LP, Wu TT. Cloning and expression of Oreochromis aurea Gonadotropin-releasing hormone cDNA in Escherichia coli and its immunogenicity for mice[J]. Chinese Journal of Biotechnology, 2006,22(4):561-566. doi: 10.1016/s1872-2075(06)60044-7 URL pmid: 16894888
[8]	王培, 王蓓, 鲁义善, 等. 吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 安徽农学通报, 2016,22(8):10-13.
	Wang P, Wang P, Lu YS, et al. Prokaryotic expression and preparation of polyclonal antibody of mIgD gene constant region in GIFT strain of Nile tilapia(Oreochromis niloticus)[J]. Anhui Agricultural Science Bulletin, 2016,22(8):10-13.
[9]	丁炜东, 曹哲明, 曹丽萍. 罗非鱼AMH基因的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 水产学报, 2010,34(5):656-663. doi: 10.3724/SP.J.1231.2010.06721 URL
	Ding WD, Cao ZM, Cao LP. Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of AMH gene from Tilapia[J]. Journal of Fisheries of China, 2010,34(5):656-663. doi: 10.3724/SP.J.1231.2010.06721 URL
[10]	王金. 尼罗罗非鱼cyp19a1a 多克隆抗体制备及高温诱导对其表达的影响[D]. 南昌:南昌大学, 2014.
	Wang J. Preparation of polyclonal antibody against cyp19a1a from Nile tilapia and effect of high temperature induction on its expression[D]. Nanchang:Nanchang University, 2014.
[11]	罗国玲, 牛金中, 黄瑜, 等. 尼罗罗非鱼Galectin-3基因的原核表达与条件优化[J]. 广东海洋大学学报, 2019(4):35-41.
	Luo GL, Niu JZ, Huang Y, et al. Prokaryotic expression and condition optimization of Galectin-3 gene in oreochromis[J]. Journal of Zhanjiang Ocean University, 2019(4):35-41.
[12]	潘传燕, 林勇, 冯鹏霏, 等. 尼罗罗非鱼Hsc70的原核表达和多克隆抗体制备[J]. 浙江农业学报, 2019,31(8):1272-1279.
	Pan CY, Lin Y, Feng PF, et al. Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Hsc70 in Nile tilapia[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis, 2019,31(8):1272-1279.
[13]	陈琼, 曹建萌, 卢迈新, 等. 尼罗罗非鱼Ly75基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备[J]. 生物技术, 2017,27(3):223-231.
	Chen Q, Cao JM, Lu MX, et al. Cloning, prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of lymphocyte antigen 75 in Oreochromis niloticus[J]. Biotechnology, 2017,27(3):223-321.
[14]	黄瑜, 牛金中, 汤菊芬, 等. 尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化[J]. 基因组学与应用生物学, 2018,37(9):3753-3758.
	Huang Y, Niu JZ, Tang JF, et al. Prokaryotic expression and condition optimization of NCCRP-1 gene in Nile tilapia[J]. Genomics and Applied Biology, 2018,37(9):3753-3758.
[15]	余艳玲, 张永德, 潘传燕, 等. 尼罗罗非鱼P2X4R基因克隆及原核表达分析[J]. 南方农业学报, 2017,48(12):153-159.
	Yu YL, Zhang YD, Pan CY, et al. Cloning and prokaryotic expression of Nile tilapia gene P2X4R[J]. Journal of Southern Agriculture, 2017,48(12):153-159.
[16]	潘传燕, 冯鹏霏, 张永德, 等. 尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化[J]. 福建农业学报, 2019(9):1053-1058.
	Pan CY, Feng PF, Zhang YD, et al. Prokaryotic expression, polyclonal antibody preparation and purification of PPARδ protein in Nile tilapia[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2019(9):1053-1058.
[17]	余艳玲, 冯鹏霏, 潘传燕, 等. 尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 江苏农业学报, 2020,35(6):1407-1412.
	Yu YL, Feng PF, Pan CY, et al. Prokaryotic expression and polyclonal antibodies preparation of TGF-β1 protein in Nile tilapia[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences, 2020,35(6):1407-1412.
[18]	潘传燕, 冯鹏霏, 林勇, 等. 尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备[J]. 生物技术, 2019(1):16-22. pmid: 7763480
	Pan CY, Feng PF, Lin Y, et al. Prokaryotic expression and purification of ZAP-70 protein, preparation of polyclonal antilbody in Nile tilapia(Oreochromis niloticus)[J]. Biotechnology, 2019(1):16-22. URL pmid: 7763480
[19]	牛金中, 黄瑜, 汤菊芬, 等. 尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化[J]. 广东海洋大学学报, 2018,38(2):80-84.
	Niu JZ, Huang Y, Tang JF, et al. Prokaryotic expression and optimization of complement 3 gene segment in nile Tilapia(Oreochromis niloticus)[J], Journal of Guangdong Ocean University, 2018,38(2):80-84.
[20]	张永德, 林勇, 潘传燕, 等. 尼罗罗非鱼MyD88基因的表达及多克隆抗体制备[J]. 水产科学, 2019,38(5):595-602.
	Zhang YD, Lin Y, Pan CY, et al. Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of MyD88 gene in Nile tilapia[J]. Fisheries Science, 2019,38(5):595-602.
[21]	张永德, 林勇, 冯鹏霏, 等. 尼罗罗非鱼Lck多克隆抗体的制备及鉴定[J]. 南方农业学报, 2018,49(11):2304-2310.
	Zhang YD, Lin Y, Feng PF, et al. Preparation and identification of Lck polyclonal antibody in Nile tilapia[J]. Journal of Southern Agriculture, 2018,49(11):2304-2310.
[22]	刘冬. 罗非鱼T淋巴细胞几种标志基因的克隆及表达研究[D]. 重庆:西南大学, 2012.
	Liu D. Cloning and expression of several marker genes of T lymphocyte in Tilapia[D]. Chongqing:Southwest University, 2012.
[23]	侯增鑫. 尼罗罗非鱼TNFSF10(TRAIL)免疫功能初步研究[D]. 广州:中山大学, 2017.
	Hou ZX. Primary study on immune function of TNFSF10(TRAIL)in Tilapia, Oreochromis niloticus[D]. Guangzhou:Sun Yat-sen University, 2017.
[24]	周林燕. 罗非鱼三种17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD1, 17β-HSD3, 17β-HSD8的克隆、表达及酶活性鉴定[D]. 重庆:西南大学, 2004.
	Zhou LY. Cloning, expression and enzyme activity identification of three 17 β - hydroxysteroid dehydrogenase(17β-HSD1, 17β- hsd3, 17β- hsd8)from Tilapia[D]. Chongqing:Southwest University, 2004.
[25]	吴芳. 尼罗罗非鱼γ-干扰素基因的克隆、表达与转植的初步研究[D]. 上海:上海海洋大学, 2014.
	Wu F. Cloning, expression and transfer of interferon - γ gene from Nile tilapia, Oreochromis niloticus[D]. Shanghai:Shanghai Ocean University, 2014.
[26]	张武凤. 尼罗罗非鱼IgM、IgT重链基因的克隆及表达[D]. 重庆:西南大学, 2015.
	Zhang WF. Cloning and expression of immunoglobulin M and T in Nile tilapia[D]. Chongqing:Southwest University, 2015.
[27]	牛继敏, 牛金中, 黄瑜, 等. 尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化[J]. 安徽农学通报, 2020,26(5):6-9.
	Niu JM, Niu JZ, Huang Y, et al. Prokaryotic expression and condition optimization of Galectin-8 gene in Nile tilapia[J]. Anhui Agricultural Science Bulletin, 2020,26(5):6-9.
[28]	马莉. 豚鼠、罗非鱼GILT的分子结构及生物学性质研究[D]. 南京:南京师范大学, 2019.
	Ma L. Molecular structure and biological properties of GILT from guinea pig and tilapia[D]. Nanjing:Nanjing Normal University, 2019.
[29]	王婷茹. 尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗体制备及其在正常发育和性逆转性腺中的表达研究[D]. 重庆:西南大学, 2013.
	Wang TR. Preparation of antibodies against Dmrt1, AMH and CYP11B2 in Nile tilapia and their expression in normal developmental and sex reversal gonads[D]. Chongqing:Southwest University, 2013.
[30]	文雅, 陶妍. 尼罗罗非鱼Hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达及其抗菌活性[J]. 上海交通大学学报:农业科学版, 2012,30(4):68-75.
	Wen Y, Tao Y. Hepcidin from Tilapia, Oreochromis niloticus:its fusion expression in Escherichia coli and antimicrobial activity[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University:Agricultural Science, 2012,30(4):68-75.
[31]	顾源. 尼罗罗非鲁IGF-3蛋白表达、抗体制备及其可能受体的初步研究[D]. 重庆:西南大学, 2011.
	Gu Y. Expression of igf-3 protein in Nile tilapia, preparation of antibody and preliminary study on its receptor[D]. Chongqing:Southwest University, 2011.
[32]	魏莹莹. 尼罗罗非鱼翻译延伸因子eEF1A家族的分子克隆和表达研究[D]. 重庆:西南大学, 2011.
	Wei YY. Molecular cloning and expression of eEF1A family in Nile tilapia, Oreochromis niloticus[D]. Chongqing:Southwest University, 2011.
[33]	周宇杰. 尼罗罗非鱼白血病抑制因子(lif)cDNA的分离鉴定、可溶性表达及其生物学活性[D]. 重庆:西南大学, 2015.
	Zhou YJ. Isolation, identification, soluble expression and biological activity of LIF cDNA from Nile tilapia, Oreochromis niloticus[D]. Chongqing:Southwest University, 2015.
[34]	Suhee H. Production and bioactivity of recombinant tilapia IL-1β[J]. Korean Journal of Pathology, 2009,22(2):147-153.
[35]	Swennen D, Rentier-Delrue F, Auperin B, et al. Production and purification of biologically active recombinant tilapia(Oreochromis niloticus)prolactins[J]. Journal of Endocrinology, 1991,131(2):219-227. doi: 10.1677/joe.0.1310219 URL
[36]	Rentier-Delrue F, Swennen D, Prunet P, et al. Tilapia prolactin:molecular cloning of two cDNAs and expression in Escherichia coli[J]. DNA, 1989,8(4):261-270. doi: 10.1089/dna.1.1989.8.261 URL pmid: 2670495
[37]	Chen JY, Chang CY, Chen JC, et al. Production of biologically active recombinant tilapia insulin-like growth factor-II polypeptides in Escherichia coli cells and characterization of the genomic structure of the coding region[J]. DNA & Cell Biology, 1997,16(7):883-892. doi: 10.1089/dna.1997.16.883 URL pmid: 9260931
[38]	Hu SY, Wu JL, Huang JH. Production of tilapia insulin-like growth factor-2 in high cell density cultures of recombinant Escherichia coli[J]. Journal of Biotechnology, 2004,107(2):161-171. doi: 10.1016/j.jbiotec.2003.09.014 URL pmid: 14711499
[39]	Rentier-Delrue F, Swennen D, Philippart JC, et al. Tilapia growth hormone:molecular cloning of cDNA and expression in Escherichia coli[J]. DNA, 1989,8(4):271-278. doi: 10.1089/dna.1.1989.8.271 URL pmid: 2670496
[40]	瞿兰, 叶星, 田园园, 等. 罗非鱼3种C型溶菌酶重组蛋白的制备及与几种鱼虾溶菌酶溶菌谱的比较[J]. 生物技术通报, 2012,11:161-166.
	Zhai L, Ye X, Tian YY, et al. Preparation of three C-type recombinant lysozymes of Oreochromis aureus and comparation of their bacteriolytic spectrum with several other lysozymes[J]. Biotechnology Bulletin, 2012,11:161-166.
[41]	余艳玲, 冯鹏霏, 潘传燕, 等. 尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 江苏农业学报, 2020,35(6):1407-1412.
	Yu YL, Feng PF, Pan CY, et al. Prokaryotic expression and polyclonal antibodies preparation of TGF-β1 protein in Nile tilapia[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences, 2020,35(6):1407-1412.
[42]	Melamed P, Eliahu N, Levavi-Sivan B, et al. Hypothalamic and thyroidal regulation of growth hormone in tilapia[J]. Gen Comp Endocrinol, 1995,97(1):13-30. doi: 10.1006/gcen.1995.1002 URL pmid: 7713377
[43]	汪开毓, 贺扬, 陈德芳, 等. 罗非鱼sIgM截短重链恒定区蛋白多克隆抗体及其制备方法:中国 ZL201410149405. 1[P]. 2017-01-18.
	Wang KY, He Y, Chen DF, et al. Polyclonal antibody against truncated heavy chain constant region protein of tilapia sIgM and its preparation method:China ZL201410149405. 1[P]. 2017-01-18.
[44]	Kaiya H, Kojima M, Hosoda H, et al. Identification of tilapia ghrelin and its effects on growth hormone and prolactin release in the tilapia, Oreochromis mossambicus[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 2003,135:421-429. doi: 10.1016/S1096-4959(03)00109-X URL
[45]	Chen JY, Lin WJ, Lin TL. A fish antimicrobial peptide, tilapia hepcidin TH2-3, shows potent antitumor activity against human fibrosarcoma cells[J]. Peptides, 2009,30(9):1636-1642. doi: 10.1016/j.peptides.2009.06.009 URL
[46]	Huang HN, Rajanbabu V, Pan CY, et al. Modulation of the immune-related gene responses to protect mice against Japanese encephalitis virus using the antimicrobial peptide, tilapia hepcidin 1-5[J]. Biomaterials, 2011,32(28):6804-6814. doi: 10.1016/j.biomaterials.2011.05.053 URL
[47]	吴杰. 斑点叉尾鮰IL-1β基因克隆表达及作为亚单位疫苗佐剂的免疫效果研究[D]. 成都:四川农业大学, 2014.
	Wu J. Cloning and expression of IL-1 β gene from channel catfish(Ictalurus punctatus)and its immune effect as a subunit vaccine adjuvant[D]. Chengdu:Sichuan Agriculture University, 2014.
[48]	陈德芳, 汪开毓, 龙波, 等. 一种用于制备渔用免疫佐剂的多肽及其用途:中国 CN201510925173. 9[P]. 2016-04-13.
	Chen DF, Wang KY, Long B, et al. A polypeptide for the preparation of fishery immune adjuvant and its use:China CN201510925173.9[P]. 2016-04-13.
[49]	王瑞, 李莉萍, 黄婷, 等. 重组罗非鱼Hsp70蛋白ATPase和抗原多肽结合活性研究[J]. 水生生物学报, 2013,4:202-205.
	Wang R, Li LP, Huang T, et al. Characterization of ATPase and peptide complexing activity of recombinant tilapia heat shock protein 70[J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2013,4:202-205.
[50]	Harel K, Berta LS. Production of biologically active tethered tilapia LHβα by the methylotrophic yeast Pichia pastoris[J]. General & Comparative Endocrinology, 2004,140:222-232. doi: 10.1016/j.ygcen.2004.10.016 URL pmid: 15639150

序号	基因名称	品系	载体	表达菌株	参考文献
1	促性腺激素释放激素（GnRH）	奥利亚罗非鱼	pMAL-c2x	大肠杆菌TB1	[7]
2	膜结合型免疫球蛋白D（mIgD）	吉富罗非鱼	pET32 a（+）	大肠杆菌BL21	[8]
3	抗苗勒氏管激素（AMH）	奥利亚罗非鱼	pGEX-5x-1	大肠杆菌BL21	[9]
4	性腺型芳香化酶基因（cyp19a1a）	尼罗罗非鱼	pET-28a	大肠杆菌BL21	[10]
5	半乳糖凝集素-3（Galectin-3）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[11]
6	热休克蛋白（Hsc70）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[12]
7	淋巴细胞抗原 75（Ly75）	尼罗罗非鱼	pEASY-E2	大肠杆菌BL21（DE3）	[13]
8	非特异性细胞毒性细胞受体蛋白（NCCRP- 1）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T-1	大肠杆菌BL21	[14]
9	P2X4嘌呤受体（P2X4R）	尼罗罗非鱼	pCold II	大肠杆菌BL21（DE3）	[15]
10	过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[16]
11	转化生长因子β1（TGF-β1）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[17]
12	Zeta链相关蛋白-70（ZAP-70）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[18]
13	补体3（C3）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[19]
14	髓样分化因子（MyD88）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[20]
15	淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lck）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21（DE3）	[21]
16	T淋巴细胞特异分化抗原（CD3/δ、CD4、CD8a、Foxp3）	尼罗罗非鱼	PcoldI／pET-28a	大肠杆菌BL21（DE3）	[22]
17	肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNFSF10/TRAIL）	尼罗罗非鱼	pET-32a	Rosetta-gami	[23]
18	17β-羟类固醇脱氢酶（17β-HSD）	尼罗罗非鱼	pET Blue2	NovaBlue细胞	[24]
19	γ-干扰素（IFN-γ）	尼罗罗非鱼	PET-30c	大肠杆菌BL21（DE3）	[25]
20	免疫球蛋白M/T（IgM/IgT）重链基因	尼罗罗非鱼	PSUMO（IgM）/PET-28a（IgM、IgT）	大肠杆菌BL21	[26]
21	半乳糖凝集素-8（Galectin-8）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[27]
22	γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶（GILT）	尼罗罗非鱼	PET28a	大肠杆菌BL21	[28]
23	Doublesex和Mab-3相关的转录因子1（Dmrt1）、抗缪勒氏管激素（Amh）和醛固酮合成酶基因（Cyp11b2）	尼罗罗非鱼	pCold I	大肠杆菌BL21（DE3）	[29]
24	铁调素（hepcidin）	尼罗罗非鱼	pET-32a	大肠杆菌BL21（DE3）	[30]
25	胰岛素样生长因子3（IGF-3）	尼罗罗非鱼	Pcold I和pGex-4T-1	大肠杆菌BL21（DE3）	[31]
26	翻译延伸因子1A（eEFIA）	尼罗罗非鱼	pCold I和pGex-4T-1	大肠杆菌Rosetta	[32]
27	白血病抑制因子（Lif）	尼罗罗非鱼	pET22、pET28a及pSUMO	大肠杆菌BL21（DE3）	[33]
28	白细胞介素1β（IL-1β）	尼罗罗非鱼	pQE	大肠杆菌	[34]
29	罗非鱼催乳素I/II（TiPRL-I or II）	莫桑比罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[35]
30	罗非鱼催乳素（TiPRL-I）	尼罗罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[36]
31	胰岛素样生长因子（IGF-2）	莫桑比罗非鱼	pGEX-2T	大肠杆菌BL21（DE3）	[37]
32	胰岛素样生长因子（IGF-2）	莫桑比罗非鱼	pET28	大肠杆菌BL21（DE3）	[38]
33	生长激素（GH）	尼罗罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[39]
34	C型溶菌酶（Lysozyme-C）	奥利亚罗非鱼	pQE30	大肠杆菌M15	[40]

序号	基因名称	品系	载体	表达菌株	参考文献
1	促性腺激素释放激素（GnRH）	奥利亚罗非鱼	pMAL-c2x	大肠杆菌TB1	[7]
2	膜结合型免疫球蛋白D（mIgD）	吉富罗非鱼	pET32 a（+）	大肠杆菌BL21	[8]
3	抗苗勒氏管激素（AMH）	奥利亚罗非鱼	pGEX-5x-1	大肠杆菌BL21	[9]
4	性腺型芳香化酶基因（cyp19a1a）	尼罗罗非鱼	pET-28a	大肠杆菌BL21	[10]
5	半乳糖凝集素-3（Galectin-3）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[11]
6	热休克蛋白（Hsc70）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[12]
7	淋巴细胞抗原 75（Ly75）	尼罗罗非鱼	pEASY-E2	大肠杆菌BL21（DE3）	[13]
8	非特异性细胞毒性细胞受体蛋白（NCCRP- 1）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T-1	大肠杆菌BL21	[14]
9	P2X4嘌呤受体（P2X4R）	尼罗罗非鱼	pCold II	大肠杆菌BL21（DE3）	[15]
10	过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[16]
11	转化生长因子β1（TGF-β1）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[17]
12	Zeta链相关蛋白-70（ZAP-70）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[18]
13	补体3（C3）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[19]
14	髓样分化因子（MyD88）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21	[20]
15	淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lck）	尼罗罗非鱼	pET-B2m	大肠杆菌BL21（DE3）	[21]
16	T淋巴细胞特异分化抗原（CD3/δ、CD4、CD8a、Foxp3）	尼罗罗非鱼	PcoldI／pET-28a	大肠杆菌BL21（DE3）	[22]
17	肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNFSF10/TRAIL）	尼罗罗非鱼	pET-32a	Rosetta-gami	[23]
18	17β-羟类固醇脱氢酶（17β-HSD）	尼罗罗非鱼	pET Blue2	NovaBlue细胞	[24]
19	γ-干扰素（IFN-γ）	尼罗罗非鱼	PET-30c	大肠杆菌BL21（DE3）	[25]
20	免疫球蛋白M/T（IgM/IgT）重链基因	尼罗罗非鱼	PSUMO（IgM）/PET-28a（IgM、IgT）	大肠杆菌BL21	[26]
21	半乳糖凝集素-8（Galectin-8）	尼罗罗非鱼	pGEX-4T	大肠杆菌BL21	[27]
22	γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶（GILT）	尼罗罗非鱼	PET28a	大肠杆菌BL21	[28]
23	Doublesex和Mab-3相关的转录因子1（Dmrt1）、抗缪勒氏管激素（Amh）和醛固酮合成酶基因（Cyp11b2）	尼罗罗非鱼	pCold I	大肠杆菌BL21（DE3）	[29]
24	铁调素（hepcidin）	尼罗罗非鱼	pET-32a	大肠杆菌BL21（DE3）	[30]
25	胰岛素样生长因子3（IGF-3）	尼罗罗非鱼	Pcold I和pGex-4T-1	大肠杆菌BL21（DE3）	[31]
26	翻译延伸因子1A（eEFIA）	尼罗罗非鱼	pCold I和pGex-4T-1	大肠杆菌Rosetta	[32]
27	白血病抑制因子（Lif）	尼罗罗非鱼	pET22、pET28a及pSUMO	大肠杆菌BL21（DE3）	[33]
28	白细胞介素1β（IL-1β）	尼罗罗非鱼	pQE	大肠杆菌	[34]
29	罗非鱼催乳素I/II（TiPRL-I or II）	莫桑比罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[35]
30	罗非鱼催乳素（TiPRL-I）	尼罗罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[36]
31	胰岛素样生长因子（IGF-2）	莫桑比罗非鱼	pGEX-2T	大肠杆菌BL21（DE3）	[37]
32	胰岛素样生长因子（IGF-2）	莫桑比罗非鱼	pET28	大肠杆菌BL21（DE3）	[38]
33	生长激素（GH）	尼罗罗非鱼	pT7	大肠杆菌BL21（DE3）	[39]
34	C型溶菌酶（Lysozyme-C）	奥利亚罗非鱼	pQE30	大肠杆菌M15	[40]