Isolation,Identification and Cytotoxic Activities of Endophytic Fungifrom Taxus chinensis var. mairei

Abstract

Abstract: Plate method was used to investigate the diversity of endophytic fungi associated with Taxus chinensis var. mairei Cheng etL.K in Guangdong province，and morphological and molecular methods were combined to identify the endophytic fungal strains. A total of 22isolated strains of endophytic fungi were identified and most of them belonged to the genera of Colletotrichum，Guignardia，Botryosphaeria，Arthrinium，Xylaria，Chaetomium，Alternaria，Phomopsis，Helminthosporium. MTT method was used to evaluate their cytotoxic activities，which showed the extracts of 6 strains had inhibition rates over 50% against at least one tumor cell line at 100 μg/mL，among which the extractsof strains A233 and A240 displayed inhibition rates over 90% against the MCF-7 cell line. Therefore，the endophytic fungi from Taxus chinensisvar. mairei were rich in species diversity. Some strains exhibiting good cytotoxic activities deserve further research on their bioactive metabolites.

Key words: Taxus chinensis var. mairei , Endophytic fungi , Isolation and identification , Cytotoxic activity

maireiZhang, Qingbo, Chen Yuchan, Li Haohua, Pan Qingling, Wang Lei, Li Dongli, Tao Meihua, Zhang Weimin. Isolation,Identification and Cytotoxic Activities of Endophytic Fungifrom Taxus chinensis var. mairei[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(1): 172-177.

References

[1] Christen AA, Gibson DM, Bland J, et al. Production of taxol or taxollikecompounds in cell culture ：USA, 5019504
[P].1991-5-28.
[2] Nicolaou KC, Yang Z, Liu JJ, et al. Total synthesis of taxol[J].Nature, 1994, 367 ：630-634.
[3] Stierle A, Strobel G, Stierle D, et al. Taxol and taxane production byTaxomyces andreanae, an endophytic fungus of Pacific yew[J].Science, 1993, 260 ：214-214.
[4] 金涛, 王伟, 刘军, 等. 东北红豆杉内生真菌的分离及产紫杉醇菌的鉴定[J]. 中草药, 2007, 38（5）：770-772.
[5] 段丽丽, 陈鸿锐, 陈杰鹏, 等. 选育紫杉醇高产菌种链格孢单孢变种[J]. 中国抗生素杂志, 2008, 33（11）：650-652.
[6] Xiang Y, Lu AG, Wu WF, et al. Identification of Taxus cuspidataSieb. et Zucc. endophytic fungi-new species, species known and theirmetabolite[J]. J Forest Res, 2003, 14（4）：290-294.
[7] 葛菁萍, 平文祥, 马玺, 等. 紫杉醇产生菌 HU1353 的鉴定[J].微生物学杂志, 2004, 24（3）：19-21.
[8] 魏景超. 真菌鉴定手册[M]. 上海：上海科技出版社, 1979.
[9] 王磊, 章卫民, 李浩华, 等. 白木香内生真菌的分离及分子鉴定[J]. 菌物研究, 2009, 7（1）：37-42.
[10] White TJ, Bruns T, Lee S, et al. Amplification and direct sequencingof fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics. PCR protocols ：a guide to methods and applications[M]. San Diego ：AcademicPress, 1990 ：315-322.
[11] 李冬利, 张庆波, 陈玉婵, 等. 白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选研究[J]. 微生物学杂志, 2009, 29（5）：26-29.
[12] 郭良栋. 内生真菌研究进展[J]. 菌物系统, 2001, 20（1）：148-152.
[13] 王伟, 贺雄雷. 南方红豆杉内生菌及紫杉烷类产物的初步鉴定[J]. 中山大学学报：自然科学版, 1999, 8（3）：116-118.
[14] 孙端方, 冉雪琴, 王嘉福. 一株产紫杉醇罗汉松内生真菌的分离和鉴定[J]. 微生物学报, 2008, 48（5）：589-595.
[15] Wang JF, Li GL, Lu HY, et al. Taxol from Tubercularia sp. strainTF5, an endophytic fungus of Taxus mairei[J]. FEMS MicrobiolLett, 2000, 193（2）：249-253.
[16] 李桂玲, 王建锋, 黄耀坚, 等. 植物内生真菌抗肿瘤活性菌株的筛选[J]. 菌物系统, 2001, 20（3）：387-391.
[17] 李桂玲, 王建锋, 黄耀坚, 等. 几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究[J]. 微生物学通报, 2001, 28（6）：64-68.
[18] 张永杰, 王建锋, 黄耀坚, 等. 4 种裸子植物内生真菌抗肿瘤菌株的筛选[J]. 厦门大学学报：自然科学版, 2002, 41（6）：804-809.
[19] 傅科鹤, 章初龙, 刘树蓬, 等. 南方红豆杉内生真菌的抗菌活性[J]. 植物保护学报, 2006, 33（3）：268-272.
[20] 田仁鹏, 杨桥, 周国玲, 等. 一株产紫杉醇的南方红豆杉内生真菌的分离及分类研究[J]. 武汉植物学研究, 2006, 4（6）：541-545.
[21] 李嘉琳, 胡鸢雷, 陈维多, 等. 红豆杉内生真菌产紫杉醇相关基因 BAPT 的鉴定及初步研究[J]. 生物技术通报, 2006（增刊）：356-361.
[22] Guo BH, Wang YC, Zhou XW, et al. An endophytic taxol-producingfungus BT2 isolated from Taxus chinensis var. mairei[J]. Afr JBiotechnol, 2009, 5（10）：875-877.
[23] 郭晓静, 王俊鹏, 宋晓平, 等. 南方红豆杉产紫杉醇内生真菌的分离鉴定[J]. 西北植物学报, 2007, 27（9）：1874-1878.
[24] 余艳, 胡昌华. 南方红豆杉内生真菌 Bionectria sp. 的分离、鉴定及代谢产物活性研究[J]. 西南大学学报：自然科学版,2007, 29（6）：31-135.
[25] 程龙, 马奇明, 陶冠军, 等. 一株产紫杉醇的丝状真菌的系统分类鉴定[J]. 工业微生物, 2007, 37（4）：23-30.
[26] Wei YM, Zhou XW, Liu L, et al. An efficient transformationsystem of taxol-producing endophytic fungus EFY-21（Ozoniumsp.）[J]. Afr J Biotechnol, 2010, 9（12）：1726-1733.
[27] 王建锋, 吕华鹰, 黄耀坚, 等. 一株新的紫杉醇产生菌及其抗肿瘤活性[J]. 厦门大学学报：自然科学版, 1999, 38（4）：485-487.