链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023多功能葡糖淀粉酶SoGA的克隆、表达及鉴定

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.024

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (2): 160-166.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.024

链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023多功能葡糖淀粉酶SoGA的克隆、表达及鉴定

王苗¹, 李园园¹, 岳昌武¹, 邵美云¹, 吕玉红¹ ,保玉心¹, 黄英²

1.遵义医学院医学与生物学研究中心贵州省普通高校微生物资源及药物开发特色重点实验室，遵义 563003；
2.中国科学院微生物研究所，北京 100101

收稿日期:2014-06-23 出版日期:2015-02-05 发布日期:2015-02-06
作者简介:王苗，女，硕士，研究方向：微生物天然产物生物合成；E-mail：wmhappy@nwsuaf.edu.cn
基金资助:
基金项目：国家自然科学基金项目（31160004），国家重点基础科学研究计划（2011CB808800），贵州省教育厅特色重点实验室建设项目（黔教合KY字[2012]011号），贵州省科技学技术基金项目（黔科合J字[2010]2156号，黔科合J字[2012]2348号，黔科合SY字[2013]3013号）

Isolation, Expression and Identification of Multifunctional Glucoamylase from Marine Streptomyces olivaceus FXJ7.023

Wang Miao¹, Li Yuanyuan¹, Yue Changwu¹, Shao Meiyun¹ , Lü Yuhong¹, Bao Yuxin¹, Huang Ying²

1. Guizhou Key Laboratory of Microbial Resources & Drug Development, Zunyi Medical College, Zunyi 563003;
2. Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101

Received:2014-06-23 Published:2015-02-05 Online:2015-02-06

摘要/Abstract

摘要： 根据海洋来源链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023基因组测序结果设计特异引物，通过PCR扩增获得1条全长为1 788 bp的糖苷水解酶15家族蛋白新成员完全编码区DNA片段，该片段编码1个595个氨基酸残基、分子量为66.2 kD的预测蛋白。利用基因工程技术将该片段重组入原核表达质粒pET32a并转化宿主菌BL21（DE3）plySs，IPTG诱导融合蛋白表达，表达的包涵体融合蛋白经纯化、复性后利用DNS法测定其在不同温度、pH条件下催化不同底物产生还原糖的活性。结果表明，该酶能够水解纤维素、淀粉等多种底物产生还原糖活性，且对不同底物表现不同的最适pH和最适反应温度。

关键词: 链霉菌, 葡糖淀粉酶, 基因克隆, 蛋白表达, 酶活

Abstract: SoGA, a predicted glucoamylase encoded by a full-length 1 788 bp gene consists of 595 amino acids was cloned from Streptomyces olivaceus strain FXJ7.023 genomic DNA by PCR. Heterologous expression of SoGA in Escherischia coli strains BL21（DE3） plysS was performed and a fusion protein with molecular weight of 83.22 kD was obtained. The novel recombinant glucoamylase showed multifunctional catalytic activity of hydrolyze carboxymethylcellulose and starch under different temperature and pH.

Key words: streptomycetes, glucoamylase, gene clone, protein expression, enzyme activity

王苗, 李园园, 岳昌武, 邵美云, 吕玉红 ,保玉心, 黄英. 链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023多功能葡糖淀粉酶SoGA的克隆、表达及鉴定[J]. 生物技术通报, 2015, 31(2): 160-166.

Wang Miao, Li Yuanyuan, Yue Changwu, Shao Meiyun , Lü Yuhong, Bao Yuxin, Huang Ying. Isolation, Expression and Identification of Multifunctional Glucoamylase from Marine Streptomyces olivaceus FXJ7.023[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(2): 160-166.

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链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023多功能葡糖淀粉酶SoGA的克隆、表达及鉴定

Isolation, Expression and Identification of Multifunctional Glucoamylase from Marine Streptomyces olivaceus FXJ7.023

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