哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.029

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (6): 183-188.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.029

哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达

朱帆^1，2，3 丁燏^1，2，3 鲁义善^1，2，3 简纪常^1，2，3 吴灶和^2，3，4

1.广东海洋大学水产学院，湛江 524088；2.广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088；3.广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088；4.仲恺农业工程学院，广州 510225

收稿日期:2014-10-22 出版日期:2015-06-19 发布日期:2015-06-20
作者简介:朱帆，女，硕士研究生，研究方向：水产经济动物病害；E-mail：15622071756@163.com
基金资助:
广东省教育厅高等学校高层次人才项目

Cloning and Prokaryotic Expression of Glutathione Reductase Gene in Vibrio harveyi

Zhu Fan^1，2，3, Ding Yu^1，2，3, Lu Yishan^1，2，³, Jian Jichang^1，2，3, Wu Zaohe^2，3，4

1. Fisheries College，Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088；2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals，Zhanjiang 524088；3. Key Laboratory of Diseases Controlling for Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutions，Zhanjiang 524088；4. Zhongkai University of Agriculture and Engineering，Guangzhou 510225

Received:2014-10-22 Published:2015-06-19 Online:2015-06-20

摘要/Abstract

摘要： 经克隆哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶(GR)基因，并构建其原核表达载体，以获得相应的表达蛋白。将GR和pET-32a(+)通过BamH I和Xho I双酶切后，体外用T4连接酶连接，构建重组质粒pET-GR；然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，应用SDS-PAGE分析表达情况和表达条件。SDS-PAGE电泳获得分子量约为68.9 kD融合蛋白条带。在E.coli BL21(DE3)中重组质粒pET-GR的表达条件为28℃，0.7 mmol/L的IPTG浓度诱导4 h表达量最高，且主要以包涵体形式表达。哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因在大肠杆菌中获得了高效表达。

关键词: 哈氏弧菌, 谷胱甘肽还原酶, 基因克隆, 原核表达

Abstract: The purpose of this study is to clone glutathione reductase(GR)gene from Vibrio harveyi, construct the prokaryotic expression vector of it, and obtain the corresponding expressed protein. Digested GR and pET-32a(+)were cut with the double enzymes BamH I and Xho I, then ligated with T4 ligase to construct the recombinant plasmid pET-GR. Then pET-GR was transformed into Escherichia coli BL21(DE3), which was induced by IPTG, and their expressions were analyzed by SDS-PAGE. An approximately 68.9 kD exogenous protein was observed on the SDS-PAGE. The optimal expression condition for the recombinant plasmid pET-GR was that the recombinant E. coli BL21(DE3)was induced for 4 h at 28℃ by 0. 7 mmol/L of IPTG and it expressed in E. coli as the inclusion bodies. The conclusion of the study is that GR gene from V. harveyi can efficiently express in E. coli.

Key words: Vibrio harveyi, glutathione reductase, gene cloning, prokaryotic expression

朱帆, 丁燏, 鲁义善, 简纪常, 吴灶和. 哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达[J]. 生物技术通报, 2015, 31(6): 183-188.

Zhu Fan, Ding Yu, Lu Yishan, Jian Jichang, Wu Zaohe. Cloning and Prokaryotic Expression of Glutathione Reductase Gene in Vibrio harveyi[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(6): 183-188.

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