苏云金芽胞杆菌chiA73基因的克隆、表达和酶活性分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.021

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (8): 147-152.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.021

苏云金芽胞杆菌chiA73基因的克隆、表达和酶活性分析

张圆, 周国旺, 李海涛, 刘荣梅, 赵一夔, 高继国

东北农业大学生命科学学院,哈尔滨 150030

收稿日期:2014-12-08 出版日期:2015-08-21 发布日期:2015-08-22
作者简介:张圆,女,硕士,研究方向：生物防治微生物功能基因的发掘、研究和利用,E-mail：13009835138@126.com;周国旺为并列第一作者
基金资助:
转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX0800913B-002）,国家基础科学人才培养基金资助项目（J1210069）,国家高技术研究发展计划课题（2011AA10A203）,国家自然科学基金项目（31401812）,黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12521021）

Cloning,Expression and Enzymatic Activities of chiA73 Gene from Bacillus thuringiensis

Zhang Yuan, Zhou Guowang, Li Haitao, Liu Rongmei, Zhao Yikui, Gao Jiguo

College of Life Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150030

Received:2014-12-08 Published:2015-08-21 Online:2015-08-22

摘要/Abstract

摘要： 旨在对苏云金芽胞杆菌几丁质酶基因进行分子鉴定和酶活测定,从产几丁质酶活力高的Bt DLD171菌株中提取基因组DNA,通过PCR法克隆得到几丁质酶chiA73 基因（GenBank登录号为KJ508093）。结果显示,对chiA73 基因进行表达,获得大小约74 kD的表达产物。用荧光底物对表达产物进行酶活测定,发现表达产物只能水解荧光底物4-甲基伞形酮几丁三糖[4- MU-（GlcNAc）₃],而不能水解4-甲基伞形酮几丁单糖（4-MU-GlcNAc）。结果表明,ChiA73为一种内切几丁质酶,在pH值为8、温度为40℃时酶活性最高。

关键词: 苏云金芽胞杆菌, 几丁质酶, chiA73, 荧光底物, 酶活性

Abstract: In order to identify and detect chitinase activities from Bacillus thuringiensis strains, chitinase gene chiA73（GenBank accession number：KJ508093）from genomic DNA of Bt DLD171 producing high-yield chitinase was cloned by PCR. Gene of chitinase chiA73 was expressed and the weight of expression product was approximate 74 kD. The results measured by fluorogenic substrates showed that the expression product of chiA73 hydrolyzed 4-MU-（GlcNAc）₃only, but not 4-MU-GlcNAc. In conclusion, the work indicated that ChiA73 was one of endochitinase, and had the highest activity at pH8 and 40℃.

Key words: Bacillus thuringiensis, chitinase, chiA73, fluorogenic substrates, enzymatic activity

张圆, 周国旺, 李海涛, 刘荣梅, 赵一夔, 高继国. 苏云金芽胞杆菌chiA73基因的克隆、表达和酶活性分析[J]. 生物技术通报, 2015, 31(8): 147-152.

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