猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.03.024

生物技术通报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (3): 169-174.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.03.024

猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

欧云文^1,2, 马小元², 张杰², 丁耀忠², 张永光², 贾宁¹

1. 甘肃农业大学动物医学院,兰州 730070;
2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州 730046

收稿日期:2016-08-09 出版日期:2017-03-26 发布日期:2017-03-07
作者简介:欧云文,男,硕士,研究方向：人兽共患病及公共卫生学研究;E-mail：oyw813@163.com
基金资助:
国家国际合作项目（2012DFG31890）,国家自然科学基金项目（31072143）

Prokaryotic Expression of Gene VP2 of Porcine Parvovirus Type 1 and the Reactinogenicity Analysis of the Expressed Protein

OU Yun-wen^1,2, MA Xiao-yuan², ZHANG Jie², DING Yao-zhong², ZHANG Yong-guang², JIA Ning¹

1. College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070;
2. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046

Received:2016-08-09 Published:2017-03-26 Online:2017-03-07

摘要/Abstract

摘要： 旨在研究猪细小病毒1型（PPV1）VP2蛋白（第155-439位氨基酸）的抗原性,为开发PPV1的检测方法奠定基础。以PPV1型AV31株的DNA为模板,扩增获得849 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a（+）原核表达载体,构建pET30a-PPV1-VP2（155-439 aa）重组质粒,转入大肠杆菌BL21（DE3）;在37℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDS-PAGE分析表明,该VP2编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为39 kD;Western blot检测结果表明,该重组蛋白与PPV1阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PCV2阳性血清不发生交叉反应。该实验成功构建了PPV1-VP2（155-439 aa）原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性。

关键词: 猪细小病毒1型, VP2基因, 原核表达, 反应原性

Abstract: This experiment is aimed to study the antigenicity of VP2 protein（amino acid 155-439）of porcine parvovirus type 1（PPV1）for laying a base for the development of detecting PPV1. The 849 bp target fragment was amplified using the DNA of strain AV31of PPV1 as the template. The product was cloned into pET30a（+）vector,and recombinant plasmid pET30a-PPV1-VP2（amino acid 155-439）was constructed,then transferred into Escherichia coli BL21（DE3）for the 6 h induced expression by IPTG. The recombinant protein was purified by Ni-NTA,and refolded by different concentration of urea. The results of SDS-PAGE showed that the gene VP2 was successfully expressed in E. coli BL21（DE3）with a relative molecular weight of 39 kD. The results of Western blot showed that this recombined protein specifically reacted with PPV1 positive serum,while no cross reaction with NA-PRRSV and PCV2 positive serum. This study achieved the aims：the recombinant vector pET30a-PPV1-VP2 was successfully constructed,and the gene was successfully expressed in E. coli,and the purified and re-folded protein demonstrated promising reactinogenicity .

Key words: porcine parvovirus type 1（PPV1）, VP2 gene, prokaryotic expression, reactinogenicity

欧云文, 马小元, 张杰, 丁耀忠, 张永光, 贾宁. 猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析[J]. 生物技术通报, 2017, 33(3): 169-174.

OU Yun-wen, MA Xiao-yuan, ZHANG Jie, DING Yao-zhong, ZHANG Yong-guang, JIA Ning. Prokaryotic Expression of Gene VP2 of Porcine Parvovirus Type 1 and the Reactinogenicity Analysis of the Expressed Protein[J]. Biotechnology Bulletin, 2017, 33(3): 169-174.

参考文献

[1] 殷震, 刘景华. 动物病毒学[M]. 第2版, 北京：科学出版社, 1997：1148-1150.
[2] Ni JQ, Qiao CX, Han X, et al. Identification and genomic characterization of a novel porcine parvovirus（PPV6）in china[J]. Virology Journal, 2014, 11（203）：1-8.
[3] Cheung AK, Wu G, Wang D, et al. Identification and molecular cloning of a novel porcine parvovirus[J]. Archives of Virology, 2010, 155：801-806.
[4] Wang F, Wei YW, Zhu C, et al. Novel parvovirus sublineage in the family of Parvoviridae[J]. Virus Genes, 2010, 41：305-308.
[5] Sun JH, Huang LP, Wei Y W, et al. Prevalence of emerging porcine parvoviruses and their co-infections with porcine circovirus type 2 in China[J]. Archives of Virology, 2015（160）：1339-1344.
[6] 蔺文成, 胡峰, 任梅, 等. 猪细小病毒病国内流行状况以及防治策略[J]. 猪业科学, 2010, 9：90-94.
[7] 司艳红, 方明刚, 王汉中, 等. 猪细小病毒VP2基因的表达和类病毒颗粒的构建[J]. 中国病毒学, 2006, 21（2）：148-152.
[8] 刘业兵, 张万林. 猪细小病毒基因组结构及检测技术研究进展[J]. 中国兽药杂杂, 2007, 41（11）：50-52.
[9] 赵俊龙, 陈焕春, 吕建强, 等. 猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达[J]. 畜牧兽医学报, 2003, 34（2）：195-198.
[10] 李昌文, 仇华吉, 童光志. 猪细小病毒研究进展[J]. 动物医学进展, 2004, 25（1）：36-38.
[11] Li B, Ma JJ, Xiao SB, et al. Genome sequence of a highly prevalent porcine partetravirus in mainland China[J]. Journal of Virology, 2012, 86（3）：1899.
[12] 倪娇, 赵建增, 刘长辉, 等. 猪细小病毒在PK15细胞中增殖规律的研究[J]. 中国兽药杂志, 2009, 43（1）：21-24.
[13] Zhang HG, Huang Y, Du Q, et al. Porcine parvovirus infection induces apoptosis in PK-15 cells through activation of p53 and mitochondria-mediated pathway[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2015, 456：649-655.
[14] Li XQ, Zhu L, Liu X, et al. Differential expression of micrornas in porcine parvovirus infected porcine cell line[J]. Virology Journal, 2015, 12：128.
[15] Ren XF, Tao Y, Cui J, et al. Phylogeny and evolution of porcine parvovirus[J]. Virus Research, 2013, 178：392-397.
[16] 甄洪花, 沈志强, 单虎, 等. 猪细小病毒结构蛋白VP2研究进展[J]. 动物医学进展, 2009, 30（8）：85-88.
[17] Sun JH, Huang LP, Wei YW, et al. Identification of three PPV1 VP2 protein-specific B cell linear epitomes using monoclonal antibodies against baculovirus-expressed recombinant VP2 protein[J]. Appl Microbiol Biotechnology, 2015, 99：9025-9036.
[18] 张云鹏, 温彤, 姜伟. 大肠杆菌和酵母表达系统的研究进展[J]. 生物技术进展, 2014, 4（6）：389-393.
[19] 包义风, 应莲芳, 蒋琳. 包涵体蛋白复性技术研究进展[J]. 微生物学免疫学进展, 2012, 40（2）：84-87.

猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

Prokaryotic Expression of Gene VP2 of Porcine Parvovirus Type 1 and the Reactinogenicity Analysis of the Expressed Protein

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[1]	梅欢, 李玥, 刘可蒙, 刘吉华. 小檗碱桥酶高效原核表达及生物合成l-SLR的研究[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 277-287.
[2]	索青青, 吴楠, 杨慧, 李莉, 王锡锋. 水稻咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因的原核表达、抗体制备和应用[J]. 生物技术通报, 2022, 38(8): 135-141.
[3]	覃雪晶, 王雨涵, 曹一博, 张凌云. 青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通报, 2022, 38(8): 142-149.
[4]	王光丽, 范婵, 王辉, 卢惠芳, 夏灵尹, 黄健, 闵迅. 霍乱弧菌溶血素HlyA的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定[J]. 生物技术通报, 2022, 38(7): 269-277.
[5]	汪巧菊, 胡雨萌, 温亚亚, 宋丽, 孟闯, 潘志明, 焦新安. 新型冠状病毒S1蛋白的表达及活性鉴定[J]. 生物技术通报, 2022, 38(3): 157-163.
[6]	沈俊强, 张莉萍, 于瑞明, 王永录, 潘丽, 刘霞, 刘新生. 猪嵴病毒结构蛋白VP0与VP1原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 生物技术通报, 2022, 38(10): 243-253.
[7]	山草梅, 叶蕾, 张连虎, 况卫刚, 孙晓棠, 马建, 崔汝强. 水稻抗潜根线虫基因OsRAI1的克隆及功能分析[J]. 生物技术通报, 2021, 37(7): 146-155.
[8]	曾福源, 苏泽辉, 周诗慧, 谢妙, 庞欢瑛. 溶藻弧菌PEPCK蛋白原核表达及其乙酰化、琥珀酰化修饰的鉴定[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 84-91.
[9]	张西西, 张怡青, 李玉林, 韩笑, 王国强, 王晓军, 王旭东, 王云龙. 新型冠状病毒（SARS-CoV-2）N蛋白C端重组蛋白的原核表达、纯化及应用[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 92-97.
[10]	白福美, 李至敏, 王小琴, 胡紫微, 鲍玲玲, 李志敏. 集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 98-107.
[11]	瞿欢, 李成, 陈汭, 廖艺杰, 曹三杰, 文翼平, 颜其贵, 黄小波. 猪δ冠状病毒S1-CTD的截短表达及间接ELISA抗体方法的建立[J]. 生物技术通报, 2021, 37(5): 273-280.
[12]	彭利忠, 张鹏, 周雯雯, 曾旭辉, 张小宁. 精子特异性蛋白Cabs1多克隆抗体的制备及多用途验证[J]. 生物技术通报, 2021, 37(3): 261-270.
[13]	贺扬, 余巧玲, 王均, 覃川杰, 李华涛. 罗非鱼原核表达基因研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(2): 195-202.
[14]	唐禄, 董丽平, 尹茉莉, 刘磊, 董媛, 王会岩. 成纤维细胞生长因子20单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 生物技术通报, 2021, 37(10): 179-185.
[15]	段应策, 胡姿仪, 杨帆, 李金涛, 邬向丽, 张瑞颖. 香菇草酰乙酸水解酶基因LeOAH1克隆及表达分析[J]. 生物技术通报, 2020, 36(9): 227-234.