生物技术通报 ›› 2025, Vol. 41 ›› Issue (5): 320-332.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-1137
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吴泽银1,2(
), 黄晨阳2, 赵梦然2, 张利姣2(
), 姚方杰1,3(
)
收稿日期:2024-11-24
出版日期:2025-05-26
发布日期:2025-06-05
通讯作者:
姚方杰,女,博士,教授,研究方向 :食用菌遗传育种及高效栽培;E-mail: yaofj@aliyun.com作者简介:吴泽银,女,硕士研究生,研究方向 :食用菌遗传育种及基因挖掘;E-mail: 16643582909@163.com
基金资助:
WU Ze-yin1,2(
), HUANG Chen-yang2, ZHAO Meng-ran2, ZHANG Li-jiao2(
), YAO Fang-jie1,3(
)
Received:2024-11-24
Published:2025-05-26
Online:2025-06-05
摘要:
目的 白黄侧耳菌株CCMSSC 04611菌柄短粗,质地硬,菌盖颜色深,但其菌柄短的分子机制尚不清楚,对其进行全基因组测序组装,并与长柄白黄侧耳基因组进行比较,分析其基因组构成、遗传变异及短柄形成的原因。 方法 提取白黄侧耳CCMSSC 04611的基因组DNA,通过对其形态特征及利用二代Illumina测序平台和三代pacbio测序平台进行基因组测序、组装和注释分析,比较其与长柄白黄侧耳基因组的差异。 结果 CCMSSC 04611二代测序获得原始测序数据为8.3 Gb,过滤掉低质量序列后约为8.29 Gb纯净数据,三代测序和组装获得7.42 Gb原始数据,过滤掉低质量序列后约为7.416 Gb纯净数据,基因组GC含量为50.85%,gap数量为0;二代和三代测序联合组装后,共获得23个1 kb以上的contig,总长度为34 635 218 bp。用二代测序数据回比率和BUSCO评估对基因组组装质量进行评价,证实基因组组装结果比较可靠。预测获得的编码基因功能注释显示,共9 999个基因被注释,其中GO和KEGG数据库中分别注释到6 331和3 052个基因。与白黄侧耳CCMSSC 00406基因组比较,两者共有基因家族数量占比均达到98.33%以上;共有功能基因数占比高于83.97%;CCMSSC 04611中特有基因家族数量为124个,特有功能基因数为1 618个,并且这些基因富集在细胞组分、催化活性、转录因子、蛋白质合成、MAPK信号转导等生物学过程中。 结论 利用Illumina测序平台和pacbio revio测序平台测序获得高质量的CCMSSC 04611基因组参考数据,发现其与长柄白黄侧耳CCMSSC 00406基因组存在特有差异基因,为进一步研究CCMSSC 04611的短柄形成的分子机制奠定了理论基础。
吴泽银, 黄晨阳, 赵梦然, 张利姣, 姚方杰. 短柄白黄侧耳CCMSSC 04611基因组特异性分析[J]. 生物技术通报, 2025, 41(5): 320-332.
WU Ze-yin, HUANG Chen-yang, ZHAO Meng-ran, ZHANG Li-jiao, YAO Fang-jie. Genome-specific Analysis of Pleurotus cornucopiae CCMSSC 04611 with Short Stipe[J]. Biotechnology Bulletin, 2025, 41(5): 320-332.
| 类型Type | 数值Value |
|---|---|
| 原始reads总数Raw reads | 27 650 992 bp |
| 纯净reads总数Clean reads | 27 614 838 bp |
| 纯净reads/原始reads总数Clean reads/Raw reads | 99.87% |
| 原始碱基总数Raw bases | 8 295 297 600 bp |
| 纯净碱基总数Clean bases | 8 284 451 400 bp |
| 纯净碱基总数/原始碱基数Clean bases/Raw bases | 99.87% |
| Q30 | 95.47 |
表1 测序结果统计
Table 1 Sequencing result statistics
| 类型Type | 数值Value |
|---|---|
| 原始reads总数Raw reads | 27 650 992 bp |
| 纯净reads总数Clean reads | 27 614 838 bp |
| 纯净reads/原始reads总数Clean reads/Raw reads | 99.87% |
| 原始碱基总数Raw bases | 8 295 297 600 bp |
| 纯净碱基总数Clean bases | 8 284 451 400 bp |
| 纯净碱基总数/原始碱基数Clean bases/Raw bases | 99.87% |
| Q30 | 95.47 |
| 类型Type | 类别Item | 数值Value |
|---|---|---|
基因组组装结果 Genome assembly results | Contig的长度 Contig length | 34 635 218 bp |
| Contig数目 Contig number | 23 | |
| Contig N50的长度 Contig N50 | 2 878 553 bp | |
| Contig N90的长度 Contig N90 | 1 321 859 bp | |
| GC含量 GC content | 50.85% | |
| Gap数量 Gaps number | 0 | |
比对结果 Comparison results | 干净的reads数目 Clean reads | 27 614 838 bp |
| 基因组覆盖度 Mapped | 98.68% | |
| 基因组覆盖深度 Depth(X) | 230.33 | |
| BUSCO评估统计BUSCO assessment statistics | 完整的BUSCOs Complete BUSCOs (C) | 95.86% |
| 其他 Other | 4.14% |
表2 结果及比对统计
Table 2 Results and comparison statistics
| 类型Type | 类别Item | 数值Value |
|---|---|---|
基因组组装结果 Genome assembly results | Contig的长度 Contig length | 34 635 218 bp |
| Contig数目 Contig number | 23 | |
| Contig N50的长度 Contig N50 | 2 878 553 bp | |
| Contig N90的长度 Contig N90 | 1 321 859 bp | |
| GC含量 GC content | 50.85% | |
| Gap数量 Gaps number | 0 | |
比对结果 Comparison results | 干净的reads数目 Clean reads | 27 614 838 bp |
| 基因组覆盖度 Mapped | 98.68% | |
| 基因组覆盖深度 Depth(X) | 230.33 | |
| BUSCO评估统计BUSCO assessment statistics | 完整的BUSCOs Complete BUSCOs (C) | 95.86% |
| 其他 Other | 4.14% |
图1 基因组圈图从外到内最外面一圈为Contig;第二圈和第三圈分别为基因组正链和负链上的Gene;第四圈为重复序列;第五圈为非编码RNA,蓝色为tRNA,紫色是rRNA;第六圈为GC含量;最内圈是GC-skew
Fig. 1 Genome circle chartFrom the outside to the inside, the first circle is contig; the second and the third circles are genes on the positive and negative strands of the genome, respectively; the fourth circle is the repeat sequence; the fifth circle is non-coding RNA, blue for tRNA, and purple for rRNA; the sixth circle is GC content; the innermost circle is GC-skew
类型 Type | 数目 Number | 总长度 Length (bp) | 占总基因组的比例 Percentage (%) |
|---|---|---|---|
| ClassI | |||
| DIRS | 133 | 129 762 | 0.37 |
| LNE | 40 | 33 096 | 0.10 |
| LTR | 2 | 1 607 | 0.00 |
| LTR/Copia | 296 | 369 293 | 1.07 |
| LTR/Gypsy | 668 | 1 378 110 | 3.98 |
| PLE|LARD | 403 | 306 372 | 0.88 |
| Total ClassI repeat | 1 542 | 2 181 919 | 6.30 |
| ClassII | |||
| Helitron | 68 | 121 516 | 0.35 |
| MITE | 10 | 10 302 | 0.03 |
| TIR | 152 | 94 316 | 0.27 |
| Total ClassII repeat | 237 | 225 858 | 0.65 |
| Total unknown | 790 | 403 799 | 1.17 |
| Total repeat | 1 779 | 2 790 299 | 8.06 |
表3 重复序列预测结果统计
Table 3 Statistics of predicted result for repeat sequence
类型 Type | 数目 Number | 总长度 Length (bp) | 占总基因组的比例 Percentage (%) |
|---|---|---|---|
| ClassI | |||
| DIRS | 133 | 129 762 | 0.37 |
| LNE | 40 | 33 096 | 0.10 |
| LTR | 2 | 1 607 | 0.00 |
| LTR/Copia | 296 | 369 293 | 1.07 |
| LTR/Gypsy | 668 | 1 378 110 | 3.98 |
| PLE|LARD | 403 | 306 372 | 0.88 |
| Total ClassI repeat | 1 542 | 2 181 919 | 6.30 |
| ClassII | |||
| Helitron | 68 | 121 516 | 0.35 |
| MITE | 10 | 10 302 | 0.03 |
| TIR | 152 | 94 316 | 0.27 |
| Total ClassII repeat | 237 | 225 858 | 0.65 |
| Total unknown | 790 | 403 799 | 1.17 |
| Total repeat | 1 779 | 2 790 299 | 8.06 |
| 类型Type | 类别Item | 数值Value |
|---|---|---|
编码基因 Gene | 编码基因个数 Gene number | 10 091 |
| 编码基因总长度Gene length | 22 163 364 bp | |
| 基因平均长度Average gene length | 2 196.35 bp | |
外显子/编码区 Exon / CDS | 外显子总长度Exon length | 16 287 789 |
| 平均外显子长度Average exon length | 220.74 bp | |
| 外显子数量Exon number | 73 787 | |
| 平均外显子数量Average exon number | 7.31 | |
内含子 Intron | 内含子总长度Intron length | 5 875 575 bp |
| 平均内含子长度Average intron length | 92.24 bp | |
| 内含子数量Intron number | 63 696 | |
| 平均内含子数量Average intron number | 6.31 |
表4 基因预测结果统计
Table 4 Gene prediction result statistics
| 类型Type | 类别Item | 数值Value |
|---|---|---|
编码基因 Gene | 编码基因个数 Gene number | 10 091 |
| 编码基因总长度Gene length | 22 163 364 bp | |
| 基因平均长度Average gene length | 2 196.35 bp | |
外显子/编码区 Exon / CDS | 外显子总长度Exon length | 16 287 789 |
| 平均外显子长度Average exon length | 220.74 bp | |
| 外显子数量Exon number | 73 787 | |
| 平均外显子数量Average exon number | 7.31 | |
内含子 Intron | 内含子总长度Intron length | 5 875 575 bp |
| 平均内含子长度Average intron length | 92.24 bp | |
| 内含子数量Intron number | 63 696 | |
| 平均内含子数量Average intron number | 6.31 |
| 非编码RNA分类 RNA classify | 数量 Number | 家族数量 Number of families | 类型 Type |
|---|---|---|---|
| rRNA | 10 | 4 | 5S_rRNA、28S_rRNA、5.8S_rRNA、18S_rRNA |
| tRNA | 190 | 47 | 编码20种氨基酸的氨酰tRNA |
| Other ncRNA | 33 | 12 | U2、U4、U5、U6、Hammerhead_3、RNaseP_nuc、TPP、 snosnR60_Z15、snoZ13_snr52、snosnR61、snR75、RNase_MRP |
表5 非编码RNA预测结果统计
Table 5 Statistics of non-coding RNA prediction results
| 非编码RNA分类 RNA classify | 数量 Number | 家族数量 Number of families | 类型 Type |
|---|---|---|---|
| rRNA | 10 | 4 | 5S_rRNA、28S_rRNA、5.8S_rRNA、18S_rRNA |
| tRNA | 190 | 47 | 编码20种氨基酸的氨酰tRNA |
| Other ncRNA | 33 | 12 | U2、U4、U5、U6、Hammerhead_3、RNaseP_nuc、TPP、 snosnR60_Z15、snoZ13_snr52、snosnR61、snR75、RNase_MRP |
| 基因簇ID号 #Gene_cluster ID | Contig的ID号 Contig _ID | 起始位置 Start | 终止位置 End | 长度 Length (bp) | 类型 Type |
|---|---|---|---|---|---|
| r1c1 | Contig00001 | 503 931 | 544 749 | 40 819 | NRPS-like |
| r1c2 | Contig00001 | 1 106 039 | 1 127 164 | 21 126 | Terpene |
| r1c3 | Contig00001 | 2 750 199 | 2 793 448 | 43 250 | NRPS-like |
| r2c1 | Contig00002 | 3 253 691 | 3 268 979 | 15 289 | Terpene |
| r2c2 | Contig00002 | 3 276 877 | 3 297 317 | 20 441 | Terpene |
| r2c3 | Contig00002 | 3 894 697 | 3 915 868 | 21 172 | Terpene |
| r4c1 | Contig00004 | 3 601 453 | 3 622 626 | 21 174 | Terpene |
| r6c1 | Contig00006 | 2 008 488 | 2 036 194 | 27 707 | Terpene |
| r7c1 | Contig00007 | 304 715 | 334 478 | 29 764 | Terpene |
| r7c2 | Contig00007 | 341 162 | 384 783 | 43 622 | NRPS-like |
| r7c3 | Contig00007 | 1 156 328 | 1 175 297 | 18 970 | Terpene |
| r7c4 | Contig00007 | 1 486 737 | 1 509 354 | 22 618 | Terpene |
| r7c5 | Contig00007 | 1 595 283 | 1 616 548 | 21 266 | Terpene |
| r8c1 | Contig00008 | 1 047 994 | 1 063 788 | 15 795 | Siderophore |
| r8c2 | Contig00008 | 1 101 589 | 1 117 271 | 15 683 | Terpene |
| r8c3 | Contig00008 | 2 099 343 | 2 159 862 | 60 520 | T1PKS terpene |
| r11c1 | Contig00011 | 737 247 | 781 939 | 44 693 | NRPS-like |
| r11c2 | Contig00011 | 937 321 | 958 369 | 21 049 | Terpene |
| r12c1 | Contig00012 | 394 515 | 475 152 | 80 638 | NRPS-like NRPS |
| r12c2 | Contig00012 | 706 886 | 753 022 | 46 137 | NRPS-like |
| r13c1 | Contig00013 | 239 414 | 281 686 | 42 273 | NRPS-like |
| r13c2 | Contig00013 | 418 312 | 473 120 | 54 809 | Terpene NRPS-like |
| r13c3 | Contig00013 | 1 117 342 | 1 139 968 | 22 627 | Terpene |
| r14c1 | Contig00014 | 62 746 | 84 086 | 21 341 | Terpene |
| r18c1 | Contig00018 | 793 776 | 814 236 | 20 461 | Terpene |
| r18c2 | Contig00018 | 1 742 683 | 1 760 831 | 18 149 | Terpene |
| r18c3 | Contig00018 | 1 854 974 | 1 876 066 | 21 093 | Terpene |
| r20c1 | Contig00020 | 1 708 421 | 1 767 926 | 59 506 | T1PKS NRPS-like |
| r23c1 | Contig00023 | 129 887 | 172 868 | 42 982 | NRPS-like |
| r23c2 | Contig00023 | 954 946 | 976 139 | 21 194 | Terpene |
表6 基因簇预测结果统计
Table 6 Gene cluster prediction result statistics
| 基因簇ID号 #Gene_cluster ID | Contig的ID号 Contig _ID | 起始位置 Start | 终止位置 End | 长度 Length (bp) | 类型 Type |
|---|---|---|---|---|---|
| r1c1 | Contig00001 | 503 931 | 544 749 | 40 819 | NRPS-like |
| r1c2 | Contig00001 | 1 106 039 | 1 127 164 | 21 126 | Terpene |
| r1c3 | Contig00001 | 2 750 199 | 2 793 448 | 43 250 | NRPS-like |
| r2c1 | Contig00002 | 3 253 691 | 3 268 979 | 15 289 | Terpene |
| r2c2 | Contig00002 | 3 276 877 | 3 297 317 | 20 441 | Terpene |
| r2c3 | Contig00002 | 3 894 697 | 3 915 868 | 21 172 | Terpene |
| r4c1 | Contig00004 | 3 601 453 | 3 622 626 | 21 174 | Terpene |
| r6c1 | Contig00006 | 2 008 488 | 2 036 194 | 27 707 | Terpene |
| r7c1 | Contig00007 | 304 715 | 334 478 | 29 764 | Terpene |
| r7c2 | Contig00007 | 341 162 | 384 783 | 43 622 | NRPS-like |
| r7c3 | Contig00007 | 1 156 328 | 1 175 297 | 18 970 | Terpene |
| r7c4 | Contig00007 | 1 486 737 | 1 509 354 | 22 618 | Terpene |
| r7c5 | Contig00007 | 1 595 283 | 1 616 548 | 21 266 | Terpene |
| r8c1 | Contig00008 | 1 047 994 | 1 063 788 | 15 795 | Siderophore |
| r8c2 | Contig00008 | 1 101 589 | 1 117 271 | 15 683 | Terpene |
| r8c3 | Contig00008 | 2 099 343 | 2 159 862 | 60 520 | T1PKS terpene |
| r11c1 | Contig00011 | 737 247 | 781 939 | 44 693 | NRPS-like |
| r11c2 | Contig00011 | 937 321 | 958 369 | 21 049 | Terpene |
| r12c1 | Contig00012 | 394 515 | 475 152 | 80 638 | NRPS-like NRPS |
| r12c2 | Contig00012 | 706 886 | 753 022 | 46 137 | NRPS-like |
| r13c1 | Contig00013 | 239 414 | 281 686 | 42 273 | NRPS-like |
| r13c2 | Contig00013 | 418 312 | 473 120 | 54 809 | Terpene NRPS-like |
| r13c3 | Contig00013 | 1 117 342 | 1 139 968 | 22 627 | Terpene |
| r14c1 | Contig00014 | 62 746 | 84 086 | 21 341 | Terpene |
| r18c1 | Contig00018 | 793 776 | 814 236 | 20 461 | Terpene |
| r18c2 | Contig00018 | 1 742 683 | 1 760 831 | 18 149 | Terpene |
| r18c3 | Contig00018 | 1 854 974 | 1 876 066 | 21 093 | Terpene |
| r20c1 | Contig00020 | 1 708 421 | 1 767 926 | 59 506 | T1PKS NRPS-like |
| r23c1 | Contig00023 | 129 887 | 172 868 | 42 982 | NRPS-like |
| r23c2 | Contig00023 | 954 946 | 976 139 | 21 194 | Terpene |
功能数据库 Database | 基因数及占比 Number and percentage (%) |
|---|---|
| GO数据库GO database | 6 331(62.74) |
| KEGG数据库KEGG database | 3 052(30.24) |
| KOG数据库KOG database | 4 930(48.86) |
| Pfam数据库Pfam database | 6 660(66.00) |
| Swissprot数据库Swissprot database | 5 477(54.28) |
| TrEMBL数据库TrEMBL database | 9 986(98.96) |
| NR数据库NR database | 9 994(99.04) |
| 合计Total | 9 999(99.09) |
表7 基因功能注释统计
Table 7 Gene function annotation statistics
功能数据库 Database | 基因数及占比 Number and percentage (%) |
|---|---|
| GO数据库GO database | 6 331(62.74) |
| KEGG数据库KEGG database | 3 052(30.24) |
| KOG数据库KOG database | 4 930(48.86) |
| Pfam数据库Pfam database | 6 660(66.00) |
| Swissprot数据库Swissprot database | 5 477(54.28) |
| TrEMBL数据库TrEMBL database | 9 986(98.96) |
| NR数据库NR database | 9 994(99.04) |
| 合计Total | 9 999(99.09) |
名称 Species | 菌株4611 Strain 4611 | 菌株406 Strain 406 |
|---|---|---|
总基因数量 Number of total genes | 10 091 | 10 437 |
参与家族聚类的基因数量 Number of cluster genes | 8 825(87.45%) | 9 086(87.06%) |
总基因家族数量 Number of total gene families | 7 442 | 7 402 |
共有基因家族数量 Number of share gene families | 7 318(98.33%) | 7 318(98.87%) |
共有基因数量 Number of share genes | 8 473(83.97%) | 8 869(84.98%) |
特有基因家族数量 Number of unique gene families | 124(1.67%) | 84(1.13%) |
特有基因数量 Number of unique genes | 1 618(16.03%) | 1 568(15.02%) |
表8 基因家族分类统计
Table 8 Gene family classification statistics
名称 Species | 菌株4611 Strain 4611 | 菌株406 Strain 406 |
|---|---|---|
总基因数量 Number of total genes | 10 091 | 10 437 |
参与家族聚类的基因数量 Number of cluster genes | 8 825(87.45%) | 9 086(87.06%) |
总基因家族数量 Number of total gene families | 7 442 | 7 402 |
共有基因家族数量 Number of share gene families | 7 318(98.33%) | 7 318(98.87%) |
共有基因数量 Number of share genes | 8 473(83.97%) | 8 869(84.98%) |
特有基因家族数量 Number of unique gene families | 124(1.67%) | 84(1.13%) |
特有基因数量 Number of unique genes | 1 618(16.03%) | 1 568(15.02%) |
| 1 | 石艳丽. 平菇栽培技术 [J]. 河南农业, 2024(11): 22-24. |
| Shi YL. Techniques of Pleurotus eryngii cultivation[J]. Henan Nongye, 2024(11): 22-24. | |
| 2 | 平菇的营养价值 [J]. 吉林蔬菜, 2011(4): 68. |
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