人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

周利苹;张莲芬;雷楗勇;张文婷;蔡燕飞;金坚;

江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122,无锡214122,无锡214122,无锡214122,无锡214122,无锡214122

出版日期:2008-06-26 发布日期:2008-06-26
基金资助:
国家“863”计划项目(2006AA02Z153)

Published:2008-06-26 Online:2008-06-26

摘要/Abstract

摘要： 目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达载体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达。结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子。结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用。

关键词: C肽, 人血清白蛋白, 融合蛋白, 毕赤酵母

周利苹;张莲芬;雷楗勇;张文婷;蔡燕飞;金坚;. 人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达[J]. .

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