斑马鱼外源基因acta1-AcGFP重组及其最佳注射浓度初探

斑马鱼外源基因acta1-AcGFP重组及其最佳注射浓度初探

潘鸿捷;刘红;蔡生力;张俊;叶斐菲;王豪杰;

上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室;

出版日期:2009-06-26 发布日期:2009-06-26
基金资助:
上海市教育委员会重点学科建设项目(海洋生物学)(J50701)

Published:2009-06-26 Online:2009-06-26

摘要/Abstract

摘要： 肌动蛋白纤维(actin filament)又称微丝(microfilament,MF),由肌动蛋白(actin)组成,是骨骼肌的重要组成部分。通过PCR从斑马鱼基因组DNA中分离得到大小为2 019 bp的α肌动蛋白1(α-actin1)启动子所在区域片段。序列分析表明,该片段序列与NCBI公布的α-actin1基因5′侧翼区相应序列的相似性为98.7%,并且含有多个MEF2,E-box等对肌肉表达起调控作用的顺式元件以及在转录中起重要作用的TATA-box。将该启动子片段与绿色荧光蛋白基因(AcGFP)重组,构建肌动蛋白特异性表达载体。采用显微注射法,将线性化表达载体注入斑马鱼受精卵中,获得转绿色荧光蛋白基因斑马鱼,平均表达率最高为16.5%。并初步确定400 ng/μl为外源基因(acta1-AcGFP)的最佳注射浓度。通过观察发现,AcGFP基因主要在骨骼肌中表达,且表达量随仔鱼肌肉的发育呈增长趋势。证明了分离得到的α-actin1启动子所在区域片段具有有效的驱动功能,为进一步开展转基因观赏鱼的研究与开发提供了依据。

关键词: 肌动蛋白, 启动子, 转基因, 绿色荧光蛋白基因, 斑马鱼

潘鸿捷;刘红;蔡生力;张俊;叶斐菲;王豪杰;. 斑马鱼外源基因acta1-AcGFP重组及其最佳注射浓度初探[J]. .

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