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蛋白G IgG Fc段结合域的克隆表达及功能研究

房国梁;刘志国;宗义强;张大川;曾丽娟;付云洁;屈伸;   

  1. 武汉工业学院生物与制药工程学院;华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系;
  • 出版日期:2009-09-26 发布日期:2009-09-26

  • Published:2009-09-26 Online:2009-09-26

摘要: 旨在研究蛋白G IgG Fc段结合域(PGFB)的克隆、表达及其抗体结合功能,用于抗体的纯化。根据PGFB的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了4个寡核苷酸片段。通过重叠延伸PCR方法合成了PGFB DNA片段,测序鉴定后克隆至原核表达系统pET-28a-c(+)上,转化大肠杆菌,获得表达菌株;IPTG诱导表达PGFB,经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化后偶联到琼脂糖凝胶6B上,用其纯化多克隆抗体。结果显示,PGFB在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后纯度达到90%以上,相对分子量为12.25 kD,与预期值相符。此外,偶联产物纯化多克隆抗体达到了良好的效果,每毫升基质可结合20 mg抗体。本研究克隆构建并高效表达了具有较好抗体亲和能力的PGFB,为多克隆抗体的快速纯化提供了方便。

关键词: 蛋白G IgG Fc段结合域, 多克隆抗体, 原核表达