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细粒棘球蚴AgB8/2基因的原核表达及免疫学鉴定

陈献威;王志钢;王红霞;毕玉新;李树裕;李洁;王媛媛;   

  1. 内蒙古大学生命科学学院哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室;
  • 出版日期:2009-11-26 发布日期:2009-11-26
  • 基金资助:
    国家基础科学人才培养基金资助项目(J0730648)

  • Published:2009-11-26 Online:2009-11-26

摘要: 旨在克隆细粒棘球蚴AgB8/2基因,优化原核表达体系,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值。采用RT-PCR扩增AgB8/2基因cDNA,构建原核表达载体pET-AgB8/2并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件。纯化的AgB8/2融合蛋白经Western blot鉴定正确后,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值。结果显示,克隆的AgB8/2基因包含了273bp的完整ORF,序列分析表明与其它已报道的AgB8/2cDNA序列的同源性在99%~100%之间。优化的表达条件为,当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.05mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化的蛋白经Western blot鉴定为目的蛋白。克隆的AgB8/2基因高度保守,原核表达载体pET-AgB8/2构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体。

关键词: 细粒棘球蚴, AgB8/2基因, 基因克隆, 原核表达, 斑点免疫金渗滤法