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表达重组咖啡豆α-半乳糖苷酶的酵母工程菌的高密度发酵

高红伟;贾延军;鲍国强;季守平;檀英霞;李素波;章扬培;宫锋;   

  1. 军事医学科学院野战输血研究所;
  • 出版日期:2009-11-26 发布日期:2009-11-26
  • 基金资助:
    国家“973”项目(2002CB713804)

  • Published:2009-11-26 Online:2009-11-26

摘要: 用5L发酵罐优化了重组咖啡豆α-半乳糖苷酶酵母工程菌pPIC9K-Gal/GS115(本室构建)的高密度发酵工艺。通过对发酵条件的优化,包括甘油补充量及补充时机、甲醇诱导量及诱导时机、溶氧控制、诱导时间等,重组咖啡豆α-半乳糖苷酶在毕赤酵母中得到了高效表达。利用所确定的最适条件进行发酵,菌体密度最终达到368g/L以上,每批发酵液离心后可获得3.5L的发酵上清,上清中的蛋白含量达到3g/L以上,目的蛋白占上清总蛋白的50%以上,含量约为1.5g/L,上清中α-半乳糖苷酶的活性维持在80U/ml左右。确立工艺后又进行了3次发酵试验,证明了工艺的可行性和稳定性。为重组咖啡豆α-半乳糖苷酶在B→O血型改造和酶解大豆低聚糖方面的应用奠定了基础。

关键词: α-半乳糖苷酶, 毕赤酵母, 高密度培养