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GFP用于单核细胞增生李斯特菌PrfA调控毒力基因actA转录表达的研究

冯莹颖;张晓莉;张强;罗勤;蒋苹;钱悦;冯爱平;   

  1. 华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室;华中科技大学附属协和医院皮肤科;
  • 出版日期:2009-12-26 发布日期:2009-12-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30500025,30600535);; 教育部留学回国人员科研启动基金

  • Published:2009-12-26 Online:2009-12-26

摘要: PrfA是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究PrfA转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16质粒上,构建成表达融合载体pLSV16-PactA-gfp,然后将其电转化入LM野生株P14、PrfA高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中表达。利用荧光显微镜和荧光酶标仪检测上述3株细菌中绿色荧光蛋白的不同表达强度,从而评价actA基因依赖于PrfA的转录活性强弱。结果显示,绿色荧光蛋白在P14a中发出的荧光强度最高,P14次之,A42最弱,两两比较均有显着差异(P<0.01),表明毒力基因actA的转录水平高低与PrfA的活性成正相关,其转录表达依赖于PrfA的调控;该试验同时也显示GFP能方便、有效地用于研究PrfA调控LM不同毒力基因的转录表达水平。

关键词: 单核细胞增生李斯特菌, PrfA, actA毒力基因, 绿色荧光蛋白报告基因, 转录调控