洋桔梗的转基因研究

洋桔梗的转基因研究

陈奇;王阁奇;马莉;陈丽梅;

昆明理工大学生物技术研究中心;

出版日期:2010-03-26 发布日期:2010-03-26
基金资助:
国家自然科学基金(30670163);; 教育部留学回国人员科研启动基金(2005-55);; 云南省中青年学术与技术带头人培养费(2004PY01-5);; 昆明理工大学人才培养费

Published:2010-03-26 Online:2010-03-26

摘要/Abstract

摘要： 以叶盘为外植体,通过农杆菌菌株C58Cl(pPMP90)介导,开展了用植物表达载体pK2-35S-GFP(含GFP基因)转化洋桔梗(Eustoma russellianum)的研究。洋桔梗叶盘用农杆菌浸染15-20min,在共培养基上与农杆菌共培养2d后,转移到分化培养基上诱导愈伤组织。10d后选取部分叶盘在紫外灯下观察GFP的荧光亮点,结果80%以上的叶盘都有GFP的荧光亮点,说明农杆菌对叶盘的感染效率很高。在分化培养基上红花洋桔梗叶盘不定芽分化频率约为30%,把分化培养基上形成的小苗转移到含有Km(20mg/L)的生根培养基上,进行生根诱导筛选具有Km抗性的转基因植株,统计结果说明红花洋桔梗的转化效率为2.4%。随机选取4株具有Km抗性的洋桔梗植株进行PCR检测,结果均为阳性,证明GFP基因已整合到洋桔梗基因组中,选取经PCR检测为阳性的植株叶片,用激光共聚焦显微镜观察,结果发现有GFP的绿色荧光出现在叶片细胞质中,说明叶片中有GFP蛋白的表达,转化试验成功。

关键词: 洋桔梗, 农杆菌介导, 转基因, GFP基因

陈奇;王阁奇;马莉;陈丽梅;. 洋桔梗的转基因研究[J]. .

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