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草鱼CYP1A和ACT基因cDNA片段的克隆与鉴定

林茂;杨先乐;纪荣兴;   

  1. 集美大学水产学院;上海海洋大学农业部渔业动植物病原库;
  • 出版日期:2010-08-26 发布日期:2010-08-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(30371109)

  • Published:2010-08-26 Online:2010-08-26

摘要: 以Trizol法分别提取BNF诱导和对照处理草鱼的肝组织总RNA并合成cDNA第一链,以此为模板利用1对ACT特异性引物和(8条)6对CYP1A简并引物进行扩增。结果显示,引物对F0-R0在对照和诱导草鱼中均扩增得到预期ACTcDNA片段,而引物对F4-R4在诱导草鱼中获得预期CYP1A cDNA产物。这两个cDNA片段分别进行克隆、测序和比对,BLAST结果表明草鱼ACTcDNA片段(800 bp)与GenBank中ACT基因(登录号M25013)同源性为99.1%,推导氨基酸序列同源性为99.2%;草鱼CYP1A cDNA片段(439 bp)与鲤鱼同源性最高,为92.5%,推导氨基酸同源性为96.6%。上述序列提交GenBank,获得登录号分别为DQ211096和DQ211095。通过Mega 3.1软件的Neighbor-joining程序对CYP基因的部分cDNA序列和氨基酸序列进行比对分析并绘制进化树,根据CYP1A部分蛋白的系统发育关系,在进化上可以将参与比对的真骨鱼划分为4个主要的分支。

关键词: 草鱼, CYP1A, β-肌动蛋白, cDNA, 克隆