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RNP免疫沉淀技术在斑马鱼胸苷酸合成酶基因翻译调控研究中的应用

宋春霞;牛荣丽;王征;林秀坤;   

  1. 山东大学威海分校海洋学院;中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室;
  • 出版日期:2010-09-26 发布日期:2010-09-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(40506031,30472043)

  • Published:2010-09-26 Online:2010-09-26

摘要: 为检测斑马鱼胸苷酸合成酶基因的表达产物TS蛋白在体内是否结合于自身的mRNA,并进一步检测TS蛋白与c-myc mRNA的结合情况。采用免疫沉淀结合得到相应的RNA,即RNP免疫沉淀技术,进一步结合RT-PCR技术分析与蛋白结合的核酸序列,并用Western蛋白印迹分析了TS蛋白。结果显示,人的TS106单克隆抗体可以免疫沉淀斑马鱼的TS蛋白,抗体免疫沉淀的核酸中含有TS mRNA和c-myc mRNA。在斑马鱼中,TS蛋白在体内结合于自身的TS mRNA,并能结合c-myc mRNA,参与基因的表达调控,阐明了TS的翻译调控机制在体内条件下的作用方式,同时也为构建斑马鱼抗肿瘤药理模型提供了理论基础。

关键词: 免疫沉淀, RT-PCR, RNP, 胸苷酸合成酶, 翻译调控, 斑马鱼