人可溶性晚期糖基化终产物受体的酵母表达及其生物活性分析

人可溶性晚期糖基化终产物受体的酵母表达及其生物活性分析

张波;张璟;张庆友;莫桂玲;苏志坚;杨鹏辉;徐单单;郑青;

暨南大学药学院;暨南大学生命与健康工程研究院;

出版日期:2011-01-26 发布日期:2011-01-26
基金资助:
暨南大学211项目

Published:2011-01-26 Online:2011-01-26

摘要/Abstract

摘要： 将人可溶性晚期糖基化终产物受体(human soluble Receptor for advanced glycation end product,hsRAGE)cDNA插入巴斯德毕赤酵母组成型表达载体pGAPZαA,构建重组表达载体pGAPZαA-hsRAGE,并转化到毕赤酵母X-33中,利用含抗生素Zeocin的YPD平板筛选重组子。重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型分泌表达,在发酵液中获得了相对分子质量约45 kD的重组蛋白。摇瓶发酵结果表明,在发酵温度30℃、pH6.0、发酵时间72 h时重组蛋白表达占发酵上清液总蛋白68.4%。Western blotting显示,重组蛋白能够被相应抗体所识别。纯化后的重组hsRAGE具有与AGEs相互结合的活性,并能够显着地抑制AGEs诱导的人血管内皮细胞系ECV-304细胞NF-κB信号通路中NF-κB/p65基因的表达。

关键词: hsRAGE, 毕赤酵母, 组成型表达, 纯化, 信号通路, 生物活性

张波;张璟;张庆友;莫桂玲;苏志坚;杨鹏辉;徐单单;郑青;. 人可溶性晚期糖基化终产物受体的酵母表达及其生物活性分析[J]. .

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