香鱼甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

香鱼甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

郝晓娜;陈炯;陆新江;史雨红;

宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室;

出版日期:2011-02-26 发布日期:2011-02-26
基金资助:
长江学者和创新团队发展计划项目(IRT0734)

Published:2011-02-26 Online:2011-02-26

摘要/Abstract

摘要： GPDH(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)是合成脂肪代谢中间产物甘油-3-磷酸的关键酶。通过设计简并引物从香鱼肝cDNA文库中克隆GPDH基因,该基因cDNA序列全长577个核苷酸,单一大的开放阅读框编码一个由351个氨基酸组成的分子量为37.9kD的蛋白。蛋白序列分析表明,香鱼GPDH(aGPDH)与亚洲胡瓜鱼的GPDH序列同源性最高。系统进化树分析表明,GPDH的物种进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致。实时荧光定量PCR结果显示,aGPDH基因在香鱼肝、脾、肾、脑、心和肌肉组织均有表达。香鱼咸淡水适应以后,肝、脾、脑、心和肌肉的aGPDH的mRNA表达水平下调。成功构建重组表达质粒pET-32a-GPDH。SDS-PAGE试验表明,目的蛋白可以在大肠杆菌中大量表达;并制备了抗血清,能与目的蛋白起强的特异性反应,但不与细菌自身蛋白起反应。本研究有助于进一步理解鱼类盐度适应过程中的脂肪代谢调控机制。

关键词: GPDH, 香鱼, 基因克隆, 盐度适应, 实时荧光定量PCR, 原核表达

郝晓娜;陈炯;陆新江;史雨红;. 香鱼甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达[J]. .

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