]*>","")" /> 太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达

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太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达

谢三群;丛丽娜;张欢;王丹;   

  1. 大连工业大学生物工程学院;
  • 出版日期:2011-04-26 发布日期:2011-04-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31072224);;辽宁省教育厅创新团队项目(LT2010012);; 大连市科技计划项目(2009J31SC034)

  • Published:2011-04-26 Online:2011-04-26

摘要: 在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用。根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列。生物信息软件分析表明,其ORF为414 bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2 kD。通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶。将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18 kD。该重组CgLys蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在。上述结果将显着简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考。

关键词: 无脊椎动物, 太平洋牡蛎, i型溶菌酶, 重组表达, 纯化