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野生罂粟RNAi表达载体的构建及遗传转化

任丽蓉;张金文;魏玉杰;何庆祥;雷耀湖;陆则权;   

  1. 甘肃农业大学农学院;甘肃干旱生境作物学重点实验室;甘肃农垦农业研究所;
  • 出版日期:2011-08-26 发布日期:2011-08-26
  • 基金资助:
    教育部博士学科点研究基金项目(2007733008);;甘肃省卫生厅重点中医药科技项目(2008HDTC02);; 甘肃省农垦总公司科技项目(GZK-2009-10)

  • Published:2011-08-26 Online:2011-08-26

摘要: 通过PCR方法从质粒pGEM-bc中克隆野生罂粟BBE-COR融合基因片段约760 bp,以pHANNIBAL和植物表达载体pCAMB IA3300为基础,将克隆到的BBE-COR融合基因正向和反向片段分别插入pdk内含子的两边,经酶切、PCR鉴定及序列分析表明,特异性RNA i表达载体p3300-pHR构建成功。采用直接转化法,将重组子导入根癌农杆菌AGL1中。以野生罂粟茎尖生长点为转化受体,用农杆菌介导法将目的基因转入野生罂粟中。经卡那霉素和除草剂筛选后,共获得53株转基因植株,PCR检测后,其中14株表现阳性,可初步确定目的基因已经整合到野生罂粟基因组中。

关键词: 野生罂粟, RNAi, 根癌农杆菌, 遗传转化, 茎尖